[发明专利]酶突变体

权利要求书

1.一种包含核酸结合蛋白和表面的构建体，其中从所述结合蛋白质上除去至少一个天然可及的半胱氨酸残基，其中所述结合蛋白通过一个或多个可及半胱氨酸残基连接在所述表面上，并且其中所述结合蛋白保持其结合核酸的能力。

2.权利要求1的构建体，其中从所述结合蛋白上除去所有天然可及的半胱氨酸，并且将一个或多个非天然可及半胱氨酸残基引入所述结合蛋白。

3.权利要求2的构建体，其中通过置换引入所述非天然可及半胱氨酸残基。

4.权利要求1的构建体，其中所述结合蛋白保留一个或多个可及半的胱氨酸残基，除去其他可及的半胱氨酸残基。

5.权利要求2至4中任一项的构建体，其中通过置换除去所述天然半胱氨酸残基。

6.权利要求5的构建体，其中所述天然半胱氨酸残基被苏氨酸置换。

7.前述权利要求中任一项的构建体，其中所述可及的半胱氨酸能够与巯基特定基团反应。

8.前述权利要求中任一项的构建体，其中所述核酸结合蛋白是核酸处理酶并且保持其处理核酸的能力。

9.权利要求8的构建体，其中所述核酸处理酶衍生自核酸酶。

10.权利要求9的构建体，其中所述核酸酶是以下酶分类(EC)组中任一组的成员：3.1.11、3.1.13、3.1.14、3.1.15、3.1.16、3.1.21、3.1.22、3.1.25、3.1.26、3.1.27、3.1.30和3.1.31。

11.权利要求10的构建体，其中所述核酸处理酶衍生自核酸外切酶。

12.权利要求11的构建体，其中所述核酸外切酶包含SEQ ID NO：6、52、54和56中任一个所显示的序列或者其变体。

13.前述权利要求中任一项的构建体，其中所述核酸结合蛋白包含SEQ ID NO：8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50中任一个所显示的序列或其变体。

14.权利要求8的构建体，其中所述核酸处理酶衍生自聚合酶、解旋酶或拓扑异构酶。

15.权利要求14的构建体，其中

(a)所述聚合酶是酶分类(EC)组2.7.7.6、2.7.7.7、2.7.7.19、2.7.7.48和2.7.7.49中任一组的成员；

(b)所述解旋酶是酶分类(EC)组3.6.1.-和2.7.7.-中任一组的成员；或者

(c)所述拓扑异构酶是酶分类(EC)组5.99.1.2和5.99.1.3中任一组的成员。

16.权利要求15的构建体，其中所述聚合酶是DNA依赖的DNA聚合酶、RNA依赖的DNA聚合酶、DNA依赖的RNA聚合酶或RNA依赖的RNA聚合酶。

17.权利要求15的构建体，其中所述解旋酶是ATP依赖的DNA解旋酶、ATP依赖的RNA解旋酶或不依赖ATP的RNA解旋酶。

18.权利要求15的构建体，其中所述拓扑异构酶是促旋酶。

19.前述权利要求中任一项的构建体，其中所述表面是跨膜蛋白质孔或其亚基。

20.权利要求19的构建体，其中所述跨膜蛋白质孔是α-溶血素(α-HL)。

21.权利要求20的构建体，其中所述表面包含SEQ ID NO：2所示的序列或其变体。

22.前述权利要求中任一项的构建体，其中所述酶通过一个或多个连接体连接于所述表面。

23.权利要求22的构建体，其中所述一个或多个连接体是核酸杂交连接体。

24.一种用于测序核酸的修饰孔，包含至少一个权利要求19至21中任一项的构建体。

25.权利要求24的孔，其中所述孔包含权利要求21的构建体和6个亚基，所述亚基包含SEQ ID NO：2所示的序列或其变体。