[发明专利]具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸

权利要求书

1.具有β-葡糖苷酶活性的分离的多肽，其选自下组：

(a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2的成熟多肽具有至少60％序列同一性；

(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)由包含核苷酸序列的多核苷酸编码的多肽，所述核苷酸序列与SEQID NO：1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列同一性；和

(d)SEQ ID NO：2的成熟多肽的包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入的变体。

2.权利要求1的多肽，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其具有β-葡糖苷酶活性的片段，或由SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其具有β-葡糖苷酶活性的片段组成。

3.权利要求1的多肽，所述多肽由下述质粒中所含的多核苷酸编码：包含在大肠杆菌NRRL B-50214中的质粒pAHYG-33。

4.分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-3中任一项的多肽的核苷酸序列。

5.用于产生权利要求1-3中任一项的多肽的方法，其包括：(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；和(b)回收所述多肽。

6.用于产生权利要求1-3中任一项的多肽的方法，其包括：(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养包含核酸构建体的宿主细胞，所述核酸构建体包含编码所述多肽的核苷酸序列；和(b)回收所述多肽。

7.用于产生亲本细胞的突变体的方法，所述方法包括破坏或缺失编码权利要求1-3中任一项的多肽或其部分的多核苷酸，其导致突变体与亲本细胞相比产生较少的所述多肽。

8.用于产生权利要求1-3中任一项的多肽的方法，其包括：(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养转基因植物或植物细胞，所述转基因植物或植物细胞包含编码所述多肽的多核苷酸；和(b)回收所述多肽。

9.转基因植物、植物部分或植物细胞，其已经用编码权利要求1-3中任一项的多肽的多核苷酸转化。

10.包含权利要求4的多核苷酸的亚序列的双链抑制RNA(dsRNA)分子，其中任选地所述dsRNA是siRNA或miRNA分子。

11.用于抑制具有β-葡糖苷酶活性的多肽在细胞中表达的方法，其包括对所述细胞施用双链RNA(dsRNA)分子，或者在所述细胞中表达双链RNA(dsRNA)分子，其中所述dsRNA包含权利要求4的多核苷酸的亚序列。

12.分离的多核苷酸，其编码信号肽，所述信号肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸1至19或由SEQ ID NO：2的氨基酸1至19组成。

13.用于产生蛋白质的方法，其包括：(a)在有助于所述蛋白质产生的条件下培养重组宿主细胞，所述宿主细胞包含编码蛋白质的基因，所述基因可操作地连接于权利要求12的多核苷酸，其中所述基因对于编码信号肽的多核苷酸是外源的；和(b)回收所述蛋白质。

14.组合物，其包含权利要求1-3中任一项的多肽。

15.用于降解或转化纤维素材料的方法，其包括：在权利要求1-3中任一项的具有β-葡糖苷酶活性的多肽存在下，用酶组合物处理纤维素材料。

16.权利要求15的方法，进一步包括回收已降解的纤维素材料。

17.产生发酵产物的方法，其包括：(a)在权利要求1-3中任一项的具有β-葡糖苷酶活性的多肽存在下，用酶组合物糖化纤维素材料；(b)用一种或多种发酵微生物发酵经糖化的纤维素材料以产生发酵产物；和(c)从所述发酵中回收所述发酵产物。

18.发酵纤维素材料的方法，其包括：用一种或多种发酵微生物发酵纤维素材料，其中在权利要求1-3中任一项的具有β-葡糖苷酶活性的多肽的存在下用酶组合物糖化所述纤维素材料。

19.权利要求18的方法，其中纤维素材料的发酵产生发酵产物。

20.权利要求19的方法，进一步包括从所述发酵回收发酵产物。