[发明专利]用于分析的含细胞流体薄层的制备

说明书

技术领域

本发明涉及制备流体薄层以供分析的设备和方法，且涉及分析这种薄层的系统和方法，特别地涉及用于自动分析盒中的样品的方法和设备。本发明特定而言涉及制备细胞薄层（特别是诸如红细胞这样的细胞单层，例如不存在重叠的红细胞）以供分析的设备和方法，且涉及分析这种细胞薄层或单层的系统和方法，特别地，涉及用于自动分析盒中的样品的方法和设备。

背景技术

可利用具体试剂对细胞染色且在显微镜中检查细胞群来进行基于细胞的分析。对于基于成像的细胞诊断（例如使用显微镜，照相机和用于图像分析和诊断的软件应用）而言，重要的是形成分离细胞的单层以避免由于细胞重叠所致的错误解析。多年来，已知这样一种方法，其涉及用手(涂片)在载玻片上刮出一定体积的相关流体(例如血液)。对于集成的闭合盒，不能使用这个过程。替代地可使用窄通道的毛细填充。

从美国专利6,599,475-B1获知来提供一种塑料光学器皿来形成红细胞的薄单层以供显微镜分析。提供多个串联起来且由分隔壁分开的隔室。这些壁分别仅允许红细胞中的某些流动，以实现红细胞稀释，使得在这些隔室中的最后隔室中获得所隔离的红细胞的单层。为了实现在整个器皿上恒定的厚度，分隔壁具有焊接特征且透明盖被焊接到顶部。隔室可具有600×600×3微米的尺寸。

对于如分析血液样品的疟疾寄生物这样的应用而言，需要分析大量血液以实现所需检测限度。对于大约为红细胞尺寸(5μm)的层厚度而言，这意味着需要检查较大表面积(平方厘米)。

US6,165,739-A1描述了一种用于激光细胞测量的载玻片或塑料载片，其具有多个毛细间隙腔室。流体样品可从储集器同时进入所有腔室。在每个腔室中提供不同反应物以使得能进行多个同时反应。

发明内容

本发明的目的在于，提供用于制备流体薄层以供分析的替代设备和方法，和/或提供用于分析这种薄层的系统和方法，特别地涉及自动分析盒中样品的设备。本发明的一单独目的在于，提供从具有细胞的流体来制备层以供分析的设备和方法，其中层具有诸如红血胞这样的细胞的单层，例如不具有重叠的细胞（诸如红血胞），且涉及分析这种细胞单层的系统和方法，特别地涉及自动分析盒中的样品的方法和设备。

根据第一方面，本发明提供：

一种产生流体样品薄层或者产生含细胞(特别是红细胞)的流体层以供分析的设备，每一层具有单层细胞(特别是红细胞)，该设备具有分析腔室的二维阵列和进入通道的分支图案，进入通道的分支图案耦接到阵列中的分析腔室中的每一个以能并行填充这些分析腔室，分析腔室分别具有大致平面形状，该平面形状具有小于进入通道高度的高度以便产生流体样品薄层或者产生含细胞(特别是红细胞)的流体层，当腔室被填充流体样品时，每一层具有细胞单层。

通过提供分析腔室的二维阵列和并行地耦接腔室的进入通道的图案，可在给定面积中提供各腔室之间更多的间隔件，从而可减小腔室高度变化，同时仍能快速地填充腔室。

实施例可具有任何额外特征且某些这样的额外特征在下文中更详细地描述。

根据本发明的设备优选地还包括在进入通道(25)与分析腔室(45)之间的额外区域(55)，其中此区域高度小于进入通道(25)且大于分析腔室(45)。在一更优选的实施例中，额外区域(55)的高度小于6微米。此额外区域(55)的优点在于，具有成熟寄生物的红细胞将富集在此区。这将会防止白细胞集中在扫描区边缘从而阻碍正确分析。

腔室和/或通道可具有适合于由规定流体样品(例如含细胞的流体，特别是血液)进行毛细填充的尺寸。在本发明的实施例中，适合于毛细填充的尺寸可由用标准水溶液（诸如PBS或纯水）进行的毛细填充来限定。这意味着适合于根据本发明进行毛细填充且能够根据本发明进行毛细填充的通道例如在标准温度和压力下，使用PBS(磷酸盐缓冲盐水)作为标准，或者可选地在标准温度和压力下例如利用纯水通过毛细作用来填充。

本发明的装置优选地具有多个腔室，其与梳状或分形（fractal）填充通道和通风通道的使用相结合。在一优选实施例中，总表面将为20mm²且视场为0.2×0.2=0.04mm²，这表示500个反应腔室。用于本发明的实施例中任何实施例的腔室的数量可在1个腔室与1000个腔室之间。优选地，分析腔室中每一个的总面积在100mm²与2000mm²之间和/或分析腔室的高度在1μm与10μm之间。