[发明专利]多特异性肽

权利要求书

1.一种提供多特异性肽配体的方法，所述多特异性肽配体包含在三个或更多个氨基酸残基处与分子支架共价连接的、能够结合两种或更多种独立的靶的多肽，所述方法包括步骤： 

（a）提供多肽的第一集合，每个多肽包含能够与分子支架共价连接的两个或更多个反应基团，以及至少一个环，所述环包含在所述反应基团的两个之间对向的两个或更多个氨基酸的序列；

（b）提供如（a）中描述的多肽的第二集合；

（c）将所述第一集合的一个或更多个成员的至少一个环连接到所述第二集合的一个或更多个成员的至少一个环，来形成包含两个环的至少一个多肽，和 

（d）在至少三个氨基酸位置将所述复合的多肽轭合到分子支架上。

2.根据权利要求1的方法，其中筛选所述第一和第二集合对第一和第二靶的结合来分离步骤（c）中使用的所述一个或更多个成员。

3.根据权利要求2的方法，其中所述第一和第二集合通过以下来筛选结合： 

（i）将所述第一或第二集合的成员轭合到分子支架，筛选针对所述第一或第二靶的结合；或 

（ii）通过所述反应基团交联所述第一或第二集合的成员；

和筛选针对所述第一或第二靶的结合。

4.根据权利要求3的方法，其中所述第一和/或第二集合的成员与分子支架轭合以形成单个环。

5.根据权利要求3的方法，其中所述第一集合的成员轭合到分子支架来形成两个或更多个环，其中其单个环与所述第二集合的成员的至少一个环连接。

6.根据前述任一项权利要求的方法，其中步骤（c）引起肽配体的第三集合的形成。

7.根据权利要求6的方法，其中所述第一和第二集合之一是首次用于实验的。

8.一种提供多特异性肽配体的方法，所述多特异性肽配体包含在三个或更多个氨基酸残基处与分子支架共价连接的、能够结合两种或更多种独立的靶的多肽，所述方法包括步骤： 

（a）提供多肽的第一集合；

（b）将所述多肽轭合到分子支架上，所述分子支架在两个或更多个氨基酸残基处结合所述多肽形成至少一个环，来形成多肽轭合物的第一集合；

（c）针对与第一靶的结合筛选所述第一集合，选择结合所述第一靶的所述第一集合的成员；

（d）用多肽的第二集合重复步骤（a）到（c），产生结合第二靶的多肽轭合物的第二集合；

（e）分离来自所述第一和所述第二集合的成员的环，组合它们来形成多肽轭合物的第三集合，其中所述多肽在至少三个氨基酸处结合所述分子支架，选择能够结合第一和第二靶两者的分子。

9.根据前述任一项权利要求的方法，其中一个或更多个集合的多肽轭合物用蛋白酶处理。

10.根据权利要求9的方法，其中一个或更多个集合的所述多肽轭合物用还原剂和蛋白酶处理。

11.根据前述任一项权利要求的方法，其中多肽的一个或更多个集合由核酸分子的一个或更多个文库编码。

12.根据权利要求11的方法，其中所述集合的筛选使用遗传展示系统进行。

13.根据权利要求12的方法，其中所述遗传展示系统是噬菌体展示。

14.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述多特异性肽配体是双特异性的。

15.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述第三集合的成员与所述第一和第二靶的结合可以同时地发生。

16.根据权利要求1到14的任一项的方法，其中所述第三集合的成员与第一和第二靶的结合不能同时发生。

17.根据权利要求16的方法，其中所述第三集合的成员针对所述第一靶来筛选，结合的那些然后针对所述第二靶来筛选。

18.根据权利要求17的方法，其中在针对与所述第一靶的结合的所述第一次筛选之后，扩增所述第三集合，然后针对所述第二靶进行筛选。