[发明专利]营养缺陷型重组体巴斯德BCG菌株及其在抗寄生虫导致的人体感染中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种表达曼氏血吸虫Sm14抗原的卡介苗(BCG)牛结核杆菌的重组体疫苗菌株。本发明的疫苗菌株是用来控制由寄生虫，特别是曼氏血吸虫所引起的感染。该疫苗的疫苗菌株是一种由巴斯德BCG亚-菌株的遗传修饰获得的亮氨酸补体致活的营养缺陷型菌株。

背景技术

估计至少200百万人受到影响人类五类血吸虫之一的感染。 此外，有另外600百万处于受到这种寄生虫影响的危险之中。 

采用抗-驱虫药吡喹酮的化学治疗是主要的防治方法，然而，这种再-感染率很高[Al-Sherbiny M, Osman A, Barakat R, El Morshedy H, Bergquist R & Olds R (2003). 在体外试验中对曼氏血吸虫疫苗试验抗原的细胞和体液反应，Acta Trop. 88: 117-130; 和 Capron A, Riveau GJ, Bartley PB & McManus DP (2002). 血吸虫疫苗的前景。Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord. 2: 281-290]。

因此，开发与适当的化学治疗联合使用的有效疫苗能够代表一种有效的长期控制策略 [Pearce EJ (2003)  用于血吸虫病的疫苗方面的进展，Acta Trop. 86: 309-313; 和 Bergquist NR (2002) 血吸虫病：从危险性评估到控制，寄生虫学趋势. 18: 309-314.]。

世界卫生组织(WHO)从S.血吸虫 (Sh 28-GST)选择出曼氏血吸虫脂肪酸-结合蛋白14(Sm 14)和28-kDa谷胱甘肽S-转移酶，作为用于人体临床试验即用于抗-血吸虫疫苗应试者的主要靶分子[Bergquist, 2004,2,http://who.int/tdr/publication/tdrnews/news71/schisto.html)；BergquistR, Al-Sherbiny M, Barakat R & Olds R. (2002) 用于血吸虫病疫苗开发的蓝图，Acta Trop. 82: 183-192; 和Bergquist NR (1998) 血吸虫病疫苗开发：进展和前景，Mem Inst Oswaldo Cruz. 93 Suppl 1: 95-101.]。所述Sm14抗原的选择基于大肠杆菌中的观察，诱导针对曼氏血吸虫(35到60%)和肝片吸虫保护性免疫的重组体Sm14蛋白的试验，通过在啮齿类模型刺激的蠕虫负荷减少所确定[Vilar, M. M.; Barrientos, F; Almeida, M; Garrat, R; Tendler, M，一种与r-Sm14肽对抗血吸虫病和肝片吸虫病的试验性二价肽疫苗，Vaccine, v. 22, p. 137-144, 2003和 Tendler M, Brito CA, Vilar MM, Serra-Freire N, Diogo CM, Almeida MS, 等(1996)曼氏血吸虫脂肪酸-结合蛋白Sm14，是一种双重目标抗-寄生虫疫苗的潜在基础，Proc Natl Acad Sci USA. 93: 269-273.] 以及在羊身上使用曼氏血吸虫定义的重组体抗原Sm 14接种对抗肝片吸虫传染[Almeida MS, Torloni H, Lee-Ho P, Vilar MM, Thaumaturgo N, Simpson AJ & Tendler M (2003)，寄生虫免疫. 25: 135-137]。此外，所述Sm14的保护性致免疫效力已经在一种DNA疫苗的上下文指引下对这种蛋白进行编码基因时Nascimento E, Le?o IC, Pereira VR, Gomes YM, Chikhlikar P, August T 等 (2002) 单和多-抗原DNA疫苗对抗血吸虫病的保护性免疫。Mem Inst Oswaldo Cruz. 97 Suppl 1: 105-109] 或者经由活的-减毒的重组细菌（如沙门氏菌）变种时被证实[鼠伤寒 (Pacheco LG, Zucconi E, Mati VL, Garcia RM, Miyoshi A, Oliveira SC, 等, (2005) 口服表达14-kDa曼氏血吸虫脂肪酸-结合蛋白的活Aro减毒沙门氏菌疫苗株诱导部分对抗试验性血吸虫病的保护，Acta Trop. 95: 132-142.] 或者如从全世界使用的一种对抗肺结核疫苗-牛结核杆菌(Bacille Calmette Guérin)的BCG菌株转化获得的BCG重组体 [Varaldo PB, Leite LC, Dias WO, Miyaji EN, Torres FI, Gebara VC, 等 (2004) 重组体牛结核杆菌BCG表达曼氏血吸虫的Sm14抗原保护小鼠来自摇尾幼虫的刺激。 Infect Immun. 72: 3336-3343 和 Varaldo, P.B., Leite, L.c.c., Dias, W.O., Miyaj, E.N., Arm?a, G.R.G., Campos, A.S., Vilar, M.M., McFadden, J., Almeida, M.S., Tendler, M 和 McIntosh, D. (2006)的结核分枝杆菌密码子优化在牛结核杆菌Bacille Calmette -Guérin中曼氏血吸虫重组体的Sm14基因的基因编码来增强蛋白表达而不是保护小鼠对抗摇尾幼虫的刺激，FEMS医学微生物学和免疫学, 48, 132-139.]。