[发明专利]靶特异性非抗体蛋白质及其制备方法有效
| 申请号： | 201080020628.8 | 申请日： | 2010-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN102421789A | 公开（公告）日： | 2012-04-18 |
| 发明（设计）人： | 崔允燮;郑埈昊;俞知镐;曹炫寿;尹秀珉;金耿禄;柳成浩;金相旭 | 申请（专利权）人： | 浦项工科大学校产学协力团 |
| 主分类号： | C07K1/107 | 分类号： | C07K1/107;C07K14/485;G06F19/18;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/15;C12N1/19;C12N5/10;A61K38/18;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 雷芳;祝莲君 |
| 地址： | 韩国庆*** | 国省代码： | 韩国;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性 抗体 蛋白质 及其 制备 方法 | ||
1.一种制备靶特异性非抗体蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)在非抗体蛋白质文库中，选择与靶蛋白质的靶位点具有结构互补性的非抗体蛋白质；
(b)计算所选择的非抗体蛋白质和靶蛋白质之间的结合能；
(c)从所选择的非抗体蛋白质中，选择具有理想结合能的非抗体蛋白质；
(d)从所选择的非抗体蛋白质与靶蛋白质的界面氨基酸残基中，选择具有高结合能的氨基酸残基；和
(e)用具有低结合能的氨基酸残基替代步骤(d)中选择的氨基酸残基。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)和步骤(b)依次进行或同时进行。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中的非抗体蛋白质文库包括非抗体蛋白质，所述非抗体蛋白质分子量为10-40kDa，选自人类蛋白质，并能够形成单体、同源二聚体和同源三聚体中的任何一种或多种。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中的文库是用包含以下步骤的方法构建的：
(i)从人类蛋白质中选择具有10-40kDa分子量的蛋白质；
(ii)从步骤(i)中选择的蛋白质中排除膜蛋白质和抗体蛋白质；
(iii)从步骤(ii)中剩余的蛋白质中选择具有10或更少种已知相互作用的蛋白质；和
(iv)从步骤(iii)中选择的蛋白质中选择能形成单体、同源二聚体和同源三聚体中的任一或多种的蛋白质。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中用对接模拟进行选择。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(a)中的对接模拟是一个选择与所述靶蛋白质中预定数量或更多的靶氨基酸残基结合的非抗体蛋白质的步骤。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(e)是用噬菌体展示和生物筛选(bio-panning)技术进行的。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中的靶蛋白是EGFR(表皮生长因子受体)结构域2。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(a)中靶残基的数量是28，预定数量是10。
10.一种特异性结合EGFR结构域2的靶特异性非抗体蛋白质。
11.如权利要求10所述的靶特异性非抗体蛋白质，其特征在于，所述蛋白质由权利要求1-9任一所述的方法制备而成。
12.如权利要求11所述的靶特异性非抗体蛋白质，其特征在于，所述靶特异性非抗体蛋白质具有如SEQ ID NO.3、4或5所示的氨基酸序列。
13.一种编码权利要求10所述非抗体蛋白质的核酸。
14.如权利要求13所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有如SEQ ID NO.7、8或9所示的核酸序列。
15.一种含有权利要求13所述核酸的载体。
16.一种用权利要求15所述的载体转化的转化子。
17.一种包含权利要求10所述的非抗体蛋白质的癌症治疗组合物。
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