[发明专利]一种区分猪体和牛体明胶胶囊的方法无效
申请号: | 201080021439.2 | 申请日: | 2010-04-15 |
公开(公告)号: | CN102439433A | 公开(公告)日: | 2012-05-02 |
发明(设计)人: | 甘来翰;斯堤·苏拉达阿·穆罕默德·桑比尔;叶标吉 | 申请(专利权)人: | 马来西亚理科大学 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100 | 代理人: | 周家欣;王宏伟 |
地址: | 马来西*** | 国省代码: | 马来西亚;MY |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 区分 明胶 胶囊 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种区分猪体和牛体的明胶胶囊的方法。该方法包括从所述明胶胶囊中提取蛋白质并根据其分子量利用凝胶电泳分离所述蛋白质。
背景技术
伊斯兰教是一种生活方式,也是一个全面的宗教信仰,通过一些管理人、社会和公共方面的章程,指引它的追随者的生活。受穆斯林人的快速增长驱动,清真产品将面临更广的人群。因此,这个表述也显示出在将来对清真产品的需求会增加。例如在医学领域,需要大量的胶囊药物和补充剂进入市场,其是使用明胶作胶囊。由于明胶可来自猪或牛,穆斯林人和其他非猪肉消费者通常试图避免这些胶囊药物和补充剂,除非他们确信所述胶囊不是来自猪体。
有很多现有的技术用于确定明胶胶囊是来自猪体还是牛体。这些技术包括主成分分析(PCA),酶联免疫吸附分析(ELISA)和磷酸钙沉淀法(CCP)。然而这些方法都具有自己的缺陷,从而限制他们的有效性和可靠性。PCA时间长并且昂贵,其中凝胶经酸水解形成氨基酸,然后在HPLC分离前将氨基酸衍生化。整个方法需要时间约24小时。另外,PCA减少了数据设定的维度,这会影响分析数据的有效性。ELISA是一种非常昂贵的技术,其需要使用特定抗体。CCP技术是基于通过pH滴定法测定磷酸钙沉淀的形成,该技术强烈依赖于纯牛或猪明胶的已知浓度,因此如果明胶不纯,该方法这不能用于区分明胶来自猪体还是牛体。
因此,本发明提供了一种区分胶囊药物和补充剂中猪体明胶和牛体明胶的方法,相比文献中记载的上述已知方法,所述方法简单,快速,可靠和经济。
在此需要指出的是,尽管非猪体明胶并不是确定是否是清真明胶的唯一因素,因为清真产品也可通过其他因素确定,如依照Syarak法律屠宰牲畜,但是该方法能降低穆斯林和非猪消费者消费猪体明胶的风险。
发明内容
根据本发明的目的,提供了一种区分猪体明胶胶囊和牛体明胶胶囊的方法,包括步骤:
(a)利用硫酸铵沉淀法从所述明胶胶囊中提取蛋白质;和,
(b)根据它们的分子量利用凝胶电泳法分离所述蛋白质。
根据本发明,牛体明胶蛋白在分子量130-140kDa之间产生第一条带,在分子量120-130kDa之间产生第二条带,猪体明胶蛋白在分子量235-265kDa之间产生第一条带,在分子量115-130kDa之间产生第二条带,在分子量105-110kDa之间产生第三条带。
本发明包括很多新颖的特征,其表现在下面说明书和附图中充分描述和解释,可以理解,细节上的各种改变都不能脱离本发明的范围或损害本发明的优势。
附图说明
在此可从下面的详细说明书和附图中充分理解本发明,其仅仅是解释,因此对本发明并无限定作用,其中:
图1为利用本发明方法分析四种不同明胶胶囊样品和四种标准物得到的图像。
图2为利用本发明方法分析另一种明胶胶囊和三种标准物得到的图像。
具体实施方式
本发明主要基于的原理是:不同体的明胶包括不同的蛋白质混合物。利用此原理,发明人创造了一种利用硫酸铵沉淀法从所述明胶胶囊中提取蛋白质的方法。然后根据其分子量利用凝胶电泳(如,7.5%SDS-PAGE,在200V运行)分离这些蛋白质。由于不同蛋白质在SDS-PAGE中具有不同的迁移率,通过和标准的牛和猪明胶比较,牛和猪的明胶蛋白质的不同分布图可以用于确定明胶的来源。
依据本发明,所述方法包括步骤:
(a)使用洁净的剪刀切明胶胶囊,移出其内部物并采用一片吸纸清洁所述胶囊。
(b)称量150mg胶囊和0.835g硫酸铵。
(c)在100mL烧杯中,将所述胶囊溶解在10mL蒸馏水中,水浴保持40℃。通常明胶充分溶解需要温度在30℃以上。
(d)明胶溶解后,用磁棒持续搅拌下,向溶液中一点一点加入硫酸铵盐。
(e)加入所有盐后,所述溶液搅拌下保持30分钟。
(f)三十分钟后,将1mL上清液收集至在1mL微量离心管中。当吸出所述上清液时,所述溶液需保持持续搅拌。这能保证没有析出蛋白质沉积在烧杯底部。
(g)然后将所述离心管在14000rpm,35℃下离心分离20分钟。这是为了旋转沉积所述析出蛋白质。
(h)离心过后,从所述离心管轻轻倒出所述上清液。在所述离心管底部或侧面或会存在可见的颗粒,这取决于胶囊中的蛋白质量。如果没有可见颗粒则表示仅旋转沉积出微量的蛋白质。
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