[发明专利]利用FRET生物传感器检测配体的方法

权利要求书

1.一种利用FRET生物传感器检测配体的方法，所述FRET生物传感器包括信号域以及感应域，所述信号域包括荧光供体和荧光受体，所述感应域含有使荧光供体和荧光受体相连接的配体结合蛋白，所述方法包括在临界温度范围内，使FRET生物传感器接触含有配体的样品，其中在所述临界温度范围内发生可逆解折叠且由配体与配体结合蛋白的结合所产生的FRET比率变化最大。

2.一种利用FRET生物传感器测量配体浓度的方法，所述FRET生物传感器包括信号域以及感应域，所述信号域包括荧光供体和荧光受体，所述感应域含有使荧光供体和荧光受体相连接的配体结合蛋白感应域，所述方法包括以下步骤：

(a)在临界温度范围下，使FRET生物传感器接触含有配体的样品，其中在所述临界温度范围内发生可逆解折叠且由配体与配体结合蛋白的结合所产生的FRET比率变化最大，和

(b)测量荧光供体和荧光受体发射强度的比率变化以测量配体的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中加入酸、碱、还原剂、变性剂(离液剂)、稳定剂、表面活性剂、乳化剂和洗涤剂中至少之一以改变临界温度，然后在改变的临界温度下使生物传感器接触配体。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中FRET生物传感器包括源自嗜冷或嗜热微生物的PBP(周质结合蛋白)或通过改进其底物特异性而获得的PBP来作为配体结合蛋白以改变临界温度，并使所述配体结合蛋白在所述改变的临界温度下接触配体。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中配体选自糖、氨基酸、蛋白质、脂质、有机酸、金属或金属离子、氧化物、氢氧化物或其缀合物、无机离子、胺或聚胺、以及维生素。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中荧光供体选自荧光蛋白、荧光染料、生物发光蛋白和量子点；并且荧光受体选自波长与所述荧光供体不同的荧光蛋白、荧光染料和量子点。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中荧光供体选自荧光蛋白、荧光染料、生物发光蛋白和量子点；并且荧光受体包括降低荧光供体的荧光强度的淬灭剂或金纳米粒子。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中使用至少一个接头将荧光供体或荧光受体融合到配体结合蛋白。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其中如果配体结合蛋白是周质结合蛋白(PBP)，则临界温度范围是49-54℃。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中如果配体结合蛋白是MBP(麦芽糖结合蛋白)，则临界温度是约54℃。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其中如果配体结合蛋白是GGBP(半乳糖/葡萄糖结合蛋白)，则临界温度是约50℃。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其中如果配体结合蛋白是ALBP(阿洛糖结合蛋白)或ARBP(阿拉伯糖结合蛋白)，则临界温度是约49℃。