[发明专利]能够在具有蜜二糖、水苏四糖和棉子糖的培养基中生长的酿酒酵母菌株

权利要求书

1.一种DNA构建体包括：

(a)通过葡萄糖阻遏作用调节的异源启动子，

(b)编码酵母中功能性信号序列的序列，和

(c)编码成熟形式的α-半乳糖苷酶的MEL1基因的片段或其功能等同变异体，其中序列(b)和(c)必须在相同阅读框内。

2.如权利要求1所述的构建体，其中通过葡萄糖阻遏作用调节的异源启动子是ADH2启动子。

3.如权利要求1或2所述的构建体，其中信号序列是MEL1基因的内源性信号序列。

4.如权利要求1或2所述的构建体，其中信号序列是酵母α因子的信号序列。

5.一种DNA构建体，含有：

(a)ADH2启动子或者或其功能等同变异体，

(b)编码酵母中功能信号序列的序列，和

(c)编码成熟形式的α-半乳糖苷酶的基因的片段或其功能等同变异体，其中序列(b)和(c)必须在相同阅读框内。

6.如权利要求5所述的构建体，其中编码α-半乳糖苷酶蛋白的基因是MEL1基因。

7.如权利要求5或6所述的构建体，其中信号序列是MEL1基因的内源性信号序列。

8.如权利要求5-7任一项所述构建体，其中信号序列是酵母α因子的信号序列。

9.权利要求1-8任一项所述构建体编码的蛋白。

10.一种表达载体，含有如权利要求1-8任一项所述构建体。

11.一种微生物，含有权利要求10所述载体，权利要求1-8任一项所述的DNA构建体或权利要求9所述的蛋白。

12.如权利要求11所述的微生物，其中微生物是酵母。

13.如权利要求12所述的微生物，其中所述的微生物是酿酒酵母。

14.一种生产α-半乳糖苷酶的方法，包括：

(a)在含有α-D-半乳糖末端位置的非还原性残基的基质上，培养权利要求11，12或13中任一所述的微生物和

(b)从培养基中回收分泌的α-半乳糖苷酶。

15.一种获得细胞生物质的方法，包括：

(a)在含有α-D-半乳糖的末端的非还原性残基的基质上，培养权利要求11，12或13中任一项所述的微生物和

(b)回收细胞生物质。

16.一种获得乙醇的方法，包括：

(a)在含有α-D-半乳糖的末端的非还原性残基的基质上，培养权利要求11，12或13中任一项所述的微生物和

(b)回收所制造的乙醇。

17.如权利要求11，12或13中任一项所述的微生物，包括编码目标蛋白基因的二级构建体。

18.一种获得蛋白的方法，包括：

(a)在含有α-D-半乳糖的末端的非还原性残基的基质上，培养权利要求17所述的微生物和

(b)回收目标蛋白。

19.如权利要求14-18任一项所述的方法，其中含有α-D-半乳糖末端位置的非还原性残基的基质选自棉子糖、蜜二糖、水苏四糖、甘蔗和/或甜菜糖蜜、大豆蛋白渗透物和任何上述物质的组合。