[发明专利]可溶的“只有重链的”抗体

权利要求书

1.一种高亲和力的抗原特异性的可溶的只有重链的抗体，其：

缺少特征骆驼科相关氨基酸取代和具有未在包含重链和轻链的抗体中发现的FR2取代；

显示CDR1内的净疏水性提高和CDR3中存在的荷电氨基酸数目增加；和

包含导致FR1内的净疏水性提高和FR3中存在的荷电氨基酸数目增加的框架β折叠内的一个或多个氨基酸取代。

2.权利要求1的只有重链的抗体，其为人抗体。

3.权利要求2的只有重链的抗体，其缺少特征骆驼科相关氨基酸取代和具有未在包含重链和轻链的人抗体中发现的FR2取代。

4.权利要求1-3中任一项的只有重链的抗体，其具有10nM或更好的结合亲和力。

5.一种高亲和力的抗原特异性的可溶的VH结构域，其：

缺少特征骆驼科相关氨基酸取代和具有未在包含重链和轻链的抗体中发现的FR2取代；

显示CDR1内的净疏水性提高和CDR3中存在的荷电氨基酸数目增加；和

包含导致FR1内的疏水性提高和FR3中存在的荷电氨基酸数目增加的框架β折叠内的一个或多个氨基酸取代。

6.权利要求5的VH结构域，其为可溶的人VH结构域。

7.权利要求6的可溶的VH结构域，其缺少特征骆驼科相关氨基酸取代和具有未在包含重链和轻链的人抗体中发现的FR2取代。

8.权利要求5-7中任一项的可溶的VH结构域，其具有10nM或更好的结合亲和力。

9.一种V基因区段，当与D基因区段和J基因区段重组并亲和力成熟后，其编码权利要求5-8中任一项的可溶的VH结构域。

10.权利要求9的V基因区段，其中相对于所述V基因区段的天然种系序列，通过至少一个取代、插入或缺失或其组合对所述V基因区段的序列进行工程改造，使得其包含编码已显示有助于VH结构域的溶解性和稳定性的氨基酸残基或氨基酸序列的密码子。

11.一种D基因区段，当与权利要求9或10的V基因区段和J基因区段重组并亲和力成熟后，其编码权利要求5-8中任一项的可溶的VH结构域。

12.权利要求11的D基因区段，其中相对于所述D基因区段的天然种系序列，通过至少一个取代、插入或缺失或其组合对所述D基因区段的序列进行工程改造，使得其包含编码已确定有助于维持可溶的VH结构域的溶解性和稳定性的氨基酸残基的密码子，所述可溶的VH结构域包含由所述D基因区段编码的序列。

13.一种J基因区段，当与权利要求9或10的V基因区段和D基因区段重组并亲和力成熟后，其编码编码权利要求5-8中任一项的可溶的VH结构域。

14.权利要求13的J基因区段，其中相对于所述J基因区段的天然种系序列，通过至少一个取代、插入或缺失或其组合对所述J基因区段的序列进行工程改造，使得其包含编码已确定有助于维持可溶的VH结构域的溶解性和稳定性的氨基酸残基的密码子，所述可溶的VH结构域包含由所述J基因区段编码的序列。

15.一种异源只有重链的基因座，其包含一个或多个权利要求9或10的V基因区段、一个或多个权利要求11或12的D基因区段、一个或多个权利要求13或14的J基因区段和一个或多个各编码缺少CH1功能性的抗体恒定效应子区的恒定效应子区基因区段，其中排列所述基因区段，使得V、D和J基因区段和恒定区基因区段可重组，以产生编码权利要求1-4中任一项的高亲和力的抗原特异性的可溶的只有重链的抗体的重排的亲和力成熟的只有重链的基因座。

16.权利要求15的只有重链的基因座，排列所述只有重链的基因座以产生人只有重链的抗体或包含可溶的人VH结构域和来自另一物种的恒定区基因区段的杂合抗体。

17.权利要求15或16的只有重链的基因座，其中所述恒定区基因区段为啮齿动物来源，优选小鼠来源。

18.一种转基因非人哺乳动物，其包含权利要求15-17中任一项的异源只有重链的基因座。