[发明专利]用于将多肽转移入细胞中的方法

权利要求书

1.一种用于将多肽转移入细胞中的方法，包括下列步骤：

a)在氰酸盐溶液中温育多肽，其中在所述氰酸盐溶液中，氰酸盐离子以范围从1至1000mmol/l的浓度存在，温度范围为室温至60℃，温育时间为5分钟至24小时，并

b)在存在尿素的条件下将细胞与步骤(a)的所述多肽一起温育。

2.依照权利要求1的方法，其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。

3.依照权利要求2的方法，其中所述原核细胞是细菌，真核细胞是真菌，昆虫，鸟，爬行动物，鱼，两栖动物或哺乳动物细胞。

4.依照权利要求2的方法，其中所述真核细胞是真菌，昆虫，鸟，爬行动物，鱼，两栖动物或哺乳动物细胞。

5.依照权利要求4的方法，其中所述真菌是酵母或丝状真菌。

6.依照权利要求4的方法，其中所述哺乳动物细胞是鼠或人细胞。

7.依照权利要求4的方法，其中所述哺乳动物细胞是抗原呈递细胞(APC)。

8.依照权利要求7的方法，其中所述抗原呈递细胞(APC)是树突细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞或血管上皮细胞和上皮、间充质细胞和脑的小胶质细胞。

9.依照权利要求8的方法，其中所述树突细胞是朗格汉斯细胞。

10.一种用于检测多肽特异性免疫细胞的方法，包括下列步骤：

a)在氰酸盐溶液中温育多肽，其中在所述氰酸盐溶液中，氰酸盐离子以范围从1至1000mmol/l的浓度存在，温度范围为室温至60℃，温育时间为5分钟至24小时，并

b)在存在尿素的条件下将含有APC的细胞培养物或体液与步骤(a)的所述多肽一起温育，

c)将依照步骤b)获得的所述含有APC的细胞培养物或体液与免疫细胞或含有免疫细胞的体液一起温育，

d)同时和/或特异性检测和/或量化针对来自步骤a)的所述多肽具有特异性的免疫细胞的各种亚型。

11.依照权利要求10的方法，其中所述步骤b)中所使用的含有APC的细胞培养物或体液已经含有步骤d)中所要检测的免疫细胞的各种亚型。

12.依照权利要求10或11的方法，其中所述含有APC的细胞培养物是PBMC群、分离的单核细胞或分离的APC群，而所述含有APC的体液是全血或液体(liquor)，和/或其中所述多肽特异性免疫细胞是T细胞，或其它免疫细胞群体，或它们的混合物和/或其中所述含有免疫细胞的体液是全血和/或液体(liquor)。

13.依照权利要求12的方法，其中所述PBMC群是白细胞除去物。

14.依照权利要求12的方法，其中所述分离的单核细胞或分离的APC群是树突细胞、单核细胞、巨噬细胞或B细胞。

15.依照权利要求12的方法，其中所述T细胞是CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺CD8^dim T细胞或CD4⁺调节性T细胞。

16.依照权利要求12的方法，其中所述其它免疫细胞群体是CD56⁺CD8⁺、CD56^-CD57⁺CD8⁺NKT细胞或CD56⁺NK细胞。

17.依照权利要求14的方法，其中所述树突细胞是朗格汉斯细胞。

18.依照权利要求10-12任一项的方法，其中所述检测和/或所述量化是依靠检测所述多肽特异性免疫细胞的特异性表面标志物和标志物细胞因子TNF、IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-17或TGF-β的生成来实施的。