[发明专利]蛋白质糖基化的控制及其相关组合物和方法

权利要求书

1.一种用于降低蛋白质的糖基化水平的方法，所述方法包括在存在糖基化抑制量的糖基化抑制剂的情况下，在生长于培养物中的宿主细胞中表达包含至少一个糖基化位点的蛋白质，其中与在不存在所述抑制剂的情况下在其他方面相同的条件下生长的其他方面相同的宿主细胞中产生的其他方面相同的蛋白质相比，所述蛋白质包含较低水平的糖基化，从而控制所述蛋白质的糖基化水平。

2.权利要求1的方法，其中所述糖基化位点在配体结合位点或抗原结合位点中。

3.权利要求2的方法，其中所述糖基化水平选自在所述糖基化位点的聚糖位点占据率和在所述糖基化位点的糖基化程度。

4.权利要求3的方法，其中所述糖基化位点选自O-连接糖基化位点和N-连接糖基化位点。

5.权利要求4的方法，其中所述糖基化位点为N-连接糖基化位点，并且进一步地，其中所述糖基化位点包含氨基酸序列天冬酰胺-X-丝氨酸或天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X为除脯氨酸之外的任何氨基酸。

6.权利要求5的方法，其中所述糖基化抑制剂为选自以下抑制剂的至少一种：衣霉素、衣霉素同系物、链病毒菌素、杀枝孢菌素、安福霉素、津枝霉素、抗生素24010、抗生素MM 19290、杆菌肽、corynetoxin、焦土霉素、金霉素、1-脱氧甘露糖野尻霉素、脱氧野尻霉素、N-甲基-1-脱氧甘露糖野尻霉素、布雷菲德菌素A、葡萄糖类似物、甘露糖类似物、2-脱氧-D-葡萄糖、2-脱氧葡萄糖、D-(+)-甘露糖、D-(+)半乳糖、2-脱氧-2-氟-D-葡萄糖、1，4-双脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露糖醇(DIM)、氟代葡萄糖、氟代甘露糖、UDP-2-脱氧葡萄糖、GDP-2-脱氧葡萄糖、甲羟戊二酸单酰-CoA还原酶抑制剂、25-羟基胆甾醇、羟基胆甾醇、苦马豆素、放线酮、嘌呤霉素、放线菌素D、莫能菌素、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、密实菌素、多萜长醇-磷酰基-2-脱氧葡萄糖、N-乙酰基-D-葡糖胺、次黄嘌呤、胸苷、胆固醇、葡糖胺、甘露糖胺、栗精胺、谷氨酰胺、溴代环己烯四醇、环己烯四醇环氧化物、环己烯四醇衍生物、糖基甲基对硝基苯三氮烯、β-羟基正缬氨酸、苏型β-氟代天冬酰胺、D-(+)-葡糖酸δ-内酯、二(2-乙基己基)磷酸酯、磷酸三丁酯、十二烷基磷酸酯、(二苯甲基)-磷酸的2-二甲氨基乙酯、[2-(二苯基磷氧基)乙基]三甲基碘化铵、碘乙酸酯和氟乙酸酯。

7.权利要求6的方法，其中所述糖基化抑制剂为2-脱氧-D-葡萄糖。

8.权利要求7的方法，其中所述糖基化抑制量的范围为约0.5g/L-3g/L。

9.权利要求8的方法，所述方法还包括将所述培养物中的葡萄糖浓度维持在范围为约0.05g/L-10g/L的量。

10.权利要求8的方法，其中所述宿主细胞选自酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。

11.权利要求10的方法，其中所述哺乳动物宿主细胞选自CHO细胞、NS0细胞、NS0/1、Sp2/0、人细胞、HEK 293、BHK、COS、Hep G2、PER.C6、COS-7、TM4、CV1、VERO-76、MDCK、BRL 3A、W138、MMT 060562、TR1、MRC5和FS4。

12.权利要求11的方法，其中所述宿主细胞为CHO细胞。

13.权利要求12的方法，其中所述糖基化位点为包含选自天冬酰胺-异亮氨酸-苏氨酸(NIT)、天冬酰胺-甘氨酸-丝氨酸(NGS)、天冬酰胺-丝氨酸-苏氨酸(NST)和天冬酰胺-苏氨酸-丝氨酸(NTS)的氨基酸序列的至少一个糖基化位点。

14.根据权利要求10的方法产生的蛋白质。

15.根据权利要求13的方法产生的蛋白质。

16.权利要求15的蛋白质，其中所述蛋白质为抗体或其抗原结合部分，并且进一步地，其中所述抗体为抗人IgE抗体。

17.权利要求16的蛋白质，其中所述抗体为人抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列，所述轻链可变区具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列。