[发明专利]作为诊断方法的IGFBP-4片段检测

说明书

本发明涉及一种用于诊断心血管或癌症疾病的方法，其通过检测患者样品中的IGFBP‑4(胰岛素样生长因子结合蛋白‑4)片段来进行。还公开了特异性识别通过对IGFBP‑4的酶依赖性切割起源的新表位的抗体。

发明领域

本发明描述了一种用于诊断人疾病，包括心血管疾病和癌症疾病的方法，其包括检测患者血液中的IGFBP-4(胰岛素样生长因子结合蛋白-4)片段。

本发明提供了对IGFBP-4的源自其被特定蛋白酶PAPP-A切割后的IGFBP-4分子的蛋白水解片段(N和C端两者)特异性的抗体及抗体表位。识别这些特定表位的抗体仅对IGFBP-4片段是特异性的，并且与完整的全长IGFBP-4分子没有或者具有较低的交叉反应。可以使用抗体来开发用于定量或定性检测人血液中的IGFBP-4片段的免疫测定法。

发明背景

胰岛素样生长因子I(IGF-I)和胰岛素样生长因子II(IGF-II)(先前称为生长调节素)在结构上与胰岛素相关，并且是人血浆中循环的两种最丰富的多肽生长因子(1)。IGF是负责正常组织生长和再生的多能生长因子。另外，已经提示了IGF通过其葡萄糖降低和胰岛素致敏作用而对葡萄糖稳态具有有益的影响。然而，认为不是所有IGF效应都是有利的；如此，流行病学研究提示了IGF-I和IGF-II还牵涉常见的癌症、动脉粥样硬化和2型糖尿病的形成(2)。

IGF是由许多细胞类型，包括平滑肌细胞和巨噬细胞分泌的。IGF的细胞效应是由膜结合性高亲和力受体介导的。IGF受体是两种独特类型的，并且是由极其多种细胞表达的。IGF是有力的平滑肌细胞促细胞分裂剂，而且提示了这些多肽通过旁分泌、自分泌或内分泌机制促成动脉粥样硬化损伤的形成(3)。

在血浆和其它生物学流体中，IGF与来自称作IGF结合蛋白(IGFBP)的结构相关蛋白质家族的蛋白质复合。IGFBP结合约99％的循环IGF集合。此蛋白质家族包括至少六种IGFBP。IGFBP与IGF受体不同。认为IGFBP调控IGF在不同组织，包括骨中的效应(4)。

IGFBP-4最初以25kDa蛋白质从人骨细胞条件化培养基纯化。后来，还从自多种细胞类型收集的条件化培养基纯化出IGFBP-4，并且在多种细胞类型中揭示了IGFBP-4的表达(5，6)。自人胎盘和骨肉瘤互补DNA(cDNA)文库推导人IGFBP-4蛋白的一级结构(7，8)。人IGFBP-4的cDNA编码258个残基的蛋白质，其通过除去信号序列而加工成具有单一天冬酰胺连接的糖基化位点的237个残基的成熟蛋白质(25.6kDa)(7)。虽然培养时的多种细胞类型分泌IGFBP-4的糖基化(28-29kDa)和非糖基化(24-25kDa)形式两者，但是非糖基化通常是正常人血液中最丰富的(5，6)。

IGFBP-4在6种IGFBP间的独特之处在于在可变L域中具有两个额外的半胱氨酸残基。IGFBP-4的这些独特特性可以负责IGFBP-4的与众不同的生物学功能(13)。

成年人血清中的IGFBP-4的均值水平高于IGFBP-1、IGFBP-2、和IGFBP-6的水平；与IGFBP-5的水平相似；并且小于IGFBP-3水平。血清IGFBP-4随年龄而升高的趋势与对IGFBP-1和IGFBP-2报告的趋势相似，但是与IGFBP-3和IGFBP-5水平随年龄下降不同，提示了在人血清中，不同IGFBP的水平随年龄增加而差别地受到调节(12)。

虽然血清IGFBP-4的精确功能性作用不完全清楚，但是体外研究已经显示了，IGFBP-4抑制骨细胞和其它细胞类型中的IGF活性。Mohan等(9，10)表明IGFBP-4抑制IGF-I和IGF-II两者诱导的鸡胚颅盖细胞和MC3T3-El小鼠成骨细胞的细胞增殖。IGFBP-4抑制多种细胞类型中的IGF-I和IGF-II刺激的DNA合成(6)。