[发明专利]针对甲状腺刺激激素受体的抗体的生物测定法、所述抗体的测量试剂盒、以及用于所述生物测定法或测量试剂盒中的新的遗传修饰的细胞

说明书

技术领域

本发明涉及表达甲状腺刺激激素受体(TSHR)、cAMP依赖性的钙通道和钙敏感蛋白的细胞、包含所述细胞的组合物、所述组合物用于诊断甲状腺疾病的应用和使用所述组合物诊断甲状腺疾病的方法等。

背景技术

由垂体生成的甲状腺刺激激素(TSH)会结合存在于甲状腺中的甲状腺刺激激素受体(TSHR)，以促进甲状腺激素的分泌。由于甲状腺激素是增强全身代谢的激素，该激素的作用的异常增加或异常减少会不同地影响身智，造成甲状腺疾病。例如，关于格雷夫氏病，在体内生成甲状腺刺激抗体(TSAb)，且该抗体（而不是TSH）会过度刺激TSHR，使得甲状腺的功能被增强，并出现诸如甲状腺增大、眼球突出和心动过速等征状。另一方面，在甲状腺功能减退中，存在一些疾病，其中生成甲状腺刺激阻断抗体(TSBAb)，使得甲状腺的功能被降低，并出现诸如体重增加、抑郁和四肢无力等征状。

迄今为止，血液中含有的这些自身抗体(TSAb和TSBAb)的测定，已经被用于诊断格雷夫氏病和甲状腺功能减退。

已经报道了用于测量自身抗体的方法的代表性实例如下：

使用放射性同位素-标记的TSH或抗TSHR的单克隆抗体的放射受体测定法(TBII方法)，其中所述放射性同位素-标记的TSH或所述抗TSHR的单克隆抗体竞争性地抑制患者血清中的自身抗体对TSHR的结合，使得结合的自身抗体的量可以被测量；和

用于测量TSAb的量的生物测定法(TSAb方法)，其中用结合TSHR的抗体处理猪甲状腺细胞等，并通过使用放射性同位素-标记的cAMP测量甲状腺细胞中cAMP浓度的增加，测定TSAb的量(非专利文献1和2)。

非专利文献 1: Methods in Enzymology, 74, 405-420 (1981)

非专利文献 2: J Clin Endocrinol Metab. 1986 May; 62 (5): 855-62。

发明内容

要解决的技术问题

本发明的一个目的是，提供用于测量TSAb和/或TSBAb的组合物和用于诊断甲状腺疾病的组合物等，它们可以比常规方法更方便地操作，不需要使用要求特殊技术或装置的放射性同位素。此外，本发明的另一个目的是，提供使用所述组合物诊断甲状腺疾病的方法等。

问题的解决方案

发明人使用钙敏感蛋白来测量进入被cAMP刺激的细胞中的钙离子的量，所述cAMP由甲状腺刺激抗体(TSAb)与甲状腺刺激激素受体(TSHR)的结合形成。结果，发明人不使用放射性同位素，已经成功地测量了TSAb的量。此外，发明人还已经使用类似的原则，成功地测量了甲状腺刺激阻断抗体(TSBAb)的量，从而完成了本发明。

具体地，本发明涉及表达甲状腺刺激激素受体(TSHR)、cAMP依赖性的钙通道和钙敏感蛋白的细胞、和包含所述细胞的组合物和试剂盒。

此外，本发明涉及用于测量生物样品中甲状腺刺激抗体的量和/或甲状腺刺激阻断抗体的量的组合物和试剂盒，用于诊断甲状腺疾病的组合物和试剂盒，用于测定具有发生甲状腺疾病的高度危险的人的组合物和试剂盒，或用于测定对在甲状腺疾病治疗下的人的治疗效果的组合物和试剂盒，其包含表达TSHR、cAMP依赖性的钙通道和钙敏感蛋白的细胞。

此外，本发明涉及用于诊断甲状腺疾病的方法，用于测定具有发生甲状腺疾病的高度危险的人的方法，或用于测定甲状腺疾病治疗的有效性的方法，所述方法包括下述的步骤(1)、(2)和(3)或(1')、(2)和(3)：

(1) 制备混合物，所述混合物含有表达甲状腺刺激激素受体(TSHR)、cAMP依赖性的钙通道和钙敏感蛋白的细胞、钙敏感蛋白的发光底物、不含有Ca²⁺的培养基或不含有Ca²⁺/Mg²⁺的培养基、TSH和源自实验受试者血液的样品；或

(1') 制备混合物，所述混合物含有表达甲状腺刺激激素受体(TSHR)、cAMP依赖性的钙通道和钙敏感蛋白的细胞、钙敏感蛋白的发光底物、不含有Ca²⁺的培养基或不含有Ca²⁺/Mg²⁺的培养基和源自实验受试者血液的样品；

(2) 将含有Ca²⁺的溶液加入在(1)或(1')中制备的混合物中；和

(3) 测量从细胞发出的、钙敏感蛋白的发光（luminescence）。