[发明专利]用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法有效
申请号: | 201080029524.3 | 申请日: | 2010-04-28 |
公开(公告)号: | CN102459308A | 公开(公告)日: | 2012-05-16 |
发明(设计)人: | 野口活夫;桑田惠里;神原佳织 | 申请(专利权)人: | 迈世耐特股份公司 |
主分类号: | C07K1/113 | 分类号: | C07K1/113;C12N5/0784;C12N15/09 |
代理公司: | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人: | 胡志君;黄革生 |
地址: | 日本神*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 溶解 不溶性 蛋白质 方法 | ||
1.用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,所述方法包括:
在一种溶液中将不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合,并溶解所述不溶性蛋白质和/或肽,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的溶液的步骤;
将核苷酸加入所述溶液的步骤;和
从所述溶液中去除变性剂的步骤。
2.根据权利要求1所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述核苷酸是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。
3.根据权利要求1或2所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中构成所述核苷酸的碱基是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的任意一种,和加入一种核苷酸或加入多种核苷酸的组合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中构成所述核苷酸的磷酸基团的数量是1个至3个。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在将所述不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合后加入或同时加入所述核苷酸。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在从所述溶液中除去所述变性剂的步骤中,在用生理溶剂替换所述溶液时去除所述变性剂,并优选地,所述生理溶剂包含核苷酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述不溶性蛋白质和/或肽是天然存在的蛋白质和/或肽、通过基因重组技术产生的蛋白质和/或肽或者化学合成的蛋白质和/或肽。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述不溶性蛋白质和/或肽是抗原蛋白质。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述变性剂是尿素和/或盐酸胍。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在一种溶液中将所述不溶性蛋白质和/或肽与所述变性剂混合的步骤中,还加入还原剂。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述还原剂是二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。
12.用于将不溶性蛋白质和/或肽转导到细胞中的方法,所述方法包括:
在一种溶液中将不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合,并溶解所述不溶性蛋白质和/或肽,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的溶液的步骤;
将核苷酸加入所述溶液的步骤;和
在用生理溶剂替换所述溶液时去除所述变性剂,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的生理溶液的步骤;和
将所述生理溶液转导入目的细胞的细胞质或细胞内。
13.根据权利要求12所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中所述核苷酸是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。
14.根据权利要求12或13所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中构成所述核苷酸的碱基是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的任意一种;和加入一种核苷酸或加入多种核苷酸的组合。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中构成所述核苷酸的磷酸基团的数量是1个至3个。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中在将所述不溶性蛋白质和/或肽与所述变性剂混合后加入或同时加入所述核苷酸。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中用于替换所述蛋白质和/或肽的溶液的所述生理溶剂包含核苷酸。
18.根据权利要求12至17中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中所述细胞是具有抗原呈递功能的细胞。
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