[发明专利]用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法有效

专利信息
申请号: 201080029524.3 申请日: 2010-04-28
公开(公告)号: CN102459308A 公开(公告)日: 2012-05-16
发明(设计)人: 野口活夫;桑田惠里;神原佳织 申请(专利权)人: 迈世耐特股份公司
主分类号: C07K1/113 分类号: C07K1/113;C12N5/0784;C12N15/09
代理公司: 北京市中咨律师事务所 11247 代理人: 胡志君;黄革生
地址: 日本神*** 国省代码: 日本;JP
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摘要:
搜索关键词: 用于 溶解 不溶性 蛋白质 方法
【权利要求书】:

1.用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,所述方法包括:

在一种溶液中将不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合,并溶解所述不溶性蛋白质和/或肽,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的溶液的步骤;

将核苷酸加入所述溶液的步骤;和

从所述溶液中去除变性剂的步骤。

2.根据权利要求1所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述核苷酸是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。

3.根据权利要求1或2所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中构成所述核苷酸的碱基是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的任意一种,和加入一种核苷酸或加入多种核苷酸的组合。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中构成所述核苷酸的磷酸基团的数量是1个至3个。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在将所述不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合后加入或同时加入所述核苷酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在从所述溶液中除去所述变性剂的步骤中,在用生理溶剂替换所述溶液时去除所述变性剂,并优选地,所述生理溶剂包含核苷酸。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述不溶性蛋白质和/或肽是天然存在的蛋白质和/或肽、通过基因重组技术产生的蛋白质和/或肽或者化学合成的蛋白质和/或肽。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述不溶性蛋白质和/或肽是抗原蛋白质。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述变性剂是尿素和/或盐酸胍。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中在一种溶液中将所述不溶性蛋白质和/或肽与所述变性剂混合的步骤中,还加入还原剂。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的用于溶解不溶性蛋白质和/或肽的方法,其中所述还原剂是二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。

12.用于将不溶性蛋白质和/或肽转导到细胞中的方法,所述方法包括:

在一种溶液中将不溶性蛋白质和/或肽与变性剂混合,并溶解所述不溶性蛋白质和/或肽,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的溶液的步骤;

将核苷酸加入所述溶液的步骤;和

在用生理溶剂替换所述溶液时去除所述变性剂,从而形成所述不溶性蛋白质和/或肽的生理溶液的步骤;和

将所述生理溶液转导入目的细胞的细胞质或细胞内。

13.根据权利要求12所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中所述核苷酸是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。

14.根据权利要求12或13所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中构成所述核苷酸的碱基是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的任意一种;和加入一种核苷酸或加入多种核苷酸的组合。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中构成所述核苷酸的磷酸基团的数量是1个至3个。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中在将所述不溶性蛋白质和/或肽与所述变性剂混合后加入或同时加入所述核苷酸。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中用于替换所述蛋白质和/或肽的溶液的所述生理溶剂包含核苷酸。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的用于将不溶性蛋白质和/或肽转导入细胞的方法,其中所述细胞是具有抗原呈递功能的细胞。

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