[发明专利]用于分枝杆菌的增强的检测的方法和培养基

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2009年7月1日提交的标题为“Method and Culture Medium for Enhanced Detection of Mycobacterium(用于分枝杆菌的增强的检测的方法和培养基)”的美国临时专利申请第61/269,977号的权益，将其并入本文。

发明领域

本发明一般涉及用于分枝杆菌的增强的检测的培养基和方法。更具体地，本发明涉及针对用于改良或减少培养基中的分枝杆菌生长的检出时间(TTD)的培养基和方法的各种改良。

发明背景

分枝杆菌是细菌的一个属，其特征为抗酸性的、非运动性的、革兰氏阳性杆菌。该属包括许多种，包括：非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、鸟分枝杆菌(M.avium)、牛分枝杆菌(M.bovis)、牛分枝杆菌卡介苗(M.bovis-BCG)、龟分枝杆菌(M.chelonae)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、戈登分枝杆菌(M.gordonae)、胞内分枝杆菌(M.intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、田鼠分枝杆菌(M.microti)、瘰疬分枝杆菌(M.scrofulaceum)、副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)和结核分枝杆菌(M.tuberculosis)。分枝杆菌中的一些对于人和动物是致病的，尤其是结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和牛分枝杆菌。其他的分枝杆菌属物种(mycobacterial species)通常不是致病的，但在诸如AIDS患者的无免疫应答的个体中导致机会感染。例如，在免疫系统受抑制或免疫系统受损的受试者中，堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌的感染可导致严重的肺病。事实上，自1953年首次报道后，所报道的分枝杆菌感染的病例在美国逐渐增加；这些病例中的许多与AIDS流行有关。

在临床物种中检测分枝杆菌属物种作为临床诊断工具是重要的。历史上，认为结核分枝杆菌是该属中唯一的临床上重要的病原体。结核分枝杆菌的药物抗性菌株的发病率的增高已进一步地加强了检测该物种的需求。结核病表现出全球流行病的所有主要特性。目前，世界范围中超过三千五百万的个体罹患结核病，并导致每年四百万以上的死亡。因此，结核病是全世界主要关心的问题。结核病可由结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌(分枝杆菌科的抗酸性的、革兰氏阳性的结核杆菌)导致。在印度的马德拉斯(Madras)和其他城市中还已从患者中分离了结核分枝杆菌的一些地方性致病菌株，其在某些方面不同于强毒株结核分枝杆菌H37Rv。

然而，其他分枝杆菌属物种在临床上也是重要的。这些分枝杆菌属物种有时被称作“MOTT”，即非结核分枝杆菌，通常包括鸟分枝杆菌/胞内分枝杆菌复合物生物体(鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌，常称作MAIC)、戈登分枝杆菌、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、产粘液分枝杆菌(M.mucogenicum)和临床样本中分枝杆菌属物种的混合物。例如，已显示通过鸟分枝杆菌复合物(MAC)细菌的快速生长机会感染频繁发生于AIDS个体和其他的无免疫应答的个体中。在此类感染的个体中，已发现每毫升痰沉淀物至少10⁶MAC细胞。因此，可检测许多分枝杆菌属物种的检测测定在临床上是重要的。

用于检测和鉴定样品中的分枝杆菌属物种的许多临床方法需要分析细菌的物理特性(例如，抗酸细菌染色法和杆菌的显微镜检测)、生理特性(例如，在确定的培养基上的生长)或生化特性(例如，膜脂组成)。这些方法需要待检测的样品中相对高浓度的细菌，根据临床技术人员的经验和专业知识不同可能是主观的，且是费时的。因为分枝杆菌属物种通常难以在体外生长，且可能需要几周来达到有用的培养密度，所以这些方法还可能导致延迟的患者治疗和诊断完成之前与隔离感染的个体有关的花费。