[发明专利]基因完整诱导的多能细胞或转分化细胞及其产生方法

权利要求书

1.一种将非多潜能或非多能受体人或非人动物体细胞或其细胞核转化为多潜能或多能细胞或转化为细胞核或转化为不同细胞命运或细胞谱系的细胞或细胞核的方法，其包括：

提供非多潜能或非多能受体人或非人动物体细胞或非多潜能或非多能受体人或非人动物体细胞的细胞核；和

用包含至少一种重编程因子的至少一种重编程组合物处理所述受体细胞或所述非多潜能或非多能受体人或非人动物体细胞的细胞核，处理时间足以将所述人或非人动物受体细胞或含有所述经处理细胞核的胞质体转化为多潜能细胞或转化为不同细胞命运或细胞谱系的细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种所述重编程因子由将至少一种重编程因子分泌至含有所述受体细胞或细胞核的水介质中的源细胞提供或者其中至少一种所述重编程因子由从多能细胞获得的细胞提取物提供。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述用重编程组合物处理所述受体细胞或细胞核的步骤包括使所述受体细胞接触所述重编程组合物不止一次和/或延长孵育期。

4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括对所述受体细胞或细胞核进行表型监测以测量其出现一种或多种与多潜能或多能细胞有关的表型。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述表型监测包括选自以下的一项或多项测量：检测与多潜能或多能细胞有关的一个或多个基因的表达；检测一个或多个与多潜能状态有关的基因的启动子的甲基化状态和/或组蛋白乙酰化状态；测量工程化多潜能性或多能性报告子构建体的表达；和检测细胞形态。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述重编程组合物包含Oct4多肽。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述重编程组合物包含Oct4和/或Nanog，所述Oct4和/或Nanog含有与报告子和/或促进所述多肽内化于所述细胞核中的部分任选地融合的多肽。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述工程化多潜能性或多能性报告子构建体为pOCT4-GFP构建体。

9.根据权利要求6所述的方法，其中通过所述表型监测确定使所述受体细胞或细胞核接触所述重编程组合物的间隔，以将所述受体细胞变成多潜能细胞所需的总持续时间缩到最短。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述重编程因子基本上不含能够对所述受体细胞进行基因修饰的病毒。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述重编程组合物包含重编程多肽。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述重编程多肽基本上不含编码所述重编程多肽的多核苷酸。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述重编程多肽包括至少一种促进所述重编程多肽进入所述受体细胞和/或促进所述重编程多肽进入所述受体细胞核中的蛋白质转导域。

14.根据权利要求13所述的方法，其中每个蛋白质转导域均包括独立选自SEQ ID NO：1-10的任一多肽或其任一组合的多肽。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述重编程多肽基本上不含能够对所述受体细胞进行基因修饰的病毒、转染培养基、链球菌溶血素O、毛地黄皂苷、阴离子两亲性化合物、脂质体和促进多核苷酸进入受体细胞的其它组分。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述重编程组合物包含一种或多种选自以下的多肽：Nanog、c-Myc、Oct4、Klf4、Sox2和Lin28。

17.根据权利要求11所述的方法，其中所述重编程组合物包含Oct4或至少一种选自Nanog、c-Myc、Klf4、Sox2和Lin28的重编程多肽。

18.根据权利要求11所述的方法，其中所述重编程多肽包含于供体细胞的细胞质中。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述供体细胞选自卵母细胞、内细胞团细胞、桑葚胚细胞、胚泡细胞、ES细胞、成人干细胞和原生殖细胞。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述供体细胞已经过基因修饰以增强一种或多种选自Nanog、c-Myc、Klf4、Sox2和Lin28的重编程多肽的表达。