[发明专利]组合工程

权利要求书

1.一种于细胞中增加重组蛋白质表达之方法，包含

a.提供一种细胞，

b.减少该细胞中之核糖体RNA基因(rDNA)沉默，

c.藉由增加转录因子之表达来增加该细胞中之核糖体RNA转录，及

d.该细胞于允许蛋白质表达之条件下培养。

2.如权利要求1之方法，其中该细胞中之重组蛋白质表达比未减少rDNA沉默之细胞增加，该增加较佳为20％至100％，更佳为20％至300％，最佳大于20％。

3.如权利要求1或2之方法，其中步骤b)包含敲低或敲除核仁重建复合物(NoRC)之一种组分且步骤c)包含过表达转录因子。

4.如权利要求1至3任一之方法，其中该转录因子为上游结合因子(UBF)。

5.如权利要求3之方法，其中该NoRC组分为TIP-5或SNF2H，以TIP-5较佳。

6.如权利要求1至5任一之方法，其中敲除TIP-5。

7.如权利要求5或6之方法，其中TIP-5沉默载体包含：

a.如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9之shRNA，或

b.如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11之miRNA。

8.如权利要求1或2之方法，其中步骤b包含藉由删除或突变或藉由过表达不能乙酰化之TIP-5变体，较佳藉由过表达TIP-5之赖氨酸突变体K633或K649来阻止TIP-5乙酰化。

9.如权利要求1至5任一之方法，其中敲除SNF2H。

10.如权利要求1至3任一之方法，其中于步骤b)中敲低TIP-5且于步骤c)中过表达UBF。

11.如权利要求1、2或8之方法，其中于步骤b)中藉由删除或突变或藉由过表达不能乙酰化之TIP-5变体，较佳藉由过表达TIP-5之赖氨酸突变体K633或K649来阻止TIP-5乙酰化及于步骤c)中过表达UBF。

12.如权利要求1至11任一之方法，其中另外于该细胞中增加神经酰胺转移蛋白(CERT)之表达，其中CERT较佳为CERT野生型或CERT Ser132-＞Ala突变体。

13.一种于细胞中产生感兴趣蛋白质的方法，包含

a.提供一种细胞，

b.减少该细胞中之核糖体RNA基因(rDNA)沉默，

c.藉由增加转录因子之表达来增加该细胞中之核糖体RNA转录，及

d.该细胞于允许该感兴趣蛋白质表达之条件下培养。

14.如权利要求13之方法，其中该方法另外包含：

e.纯化该感兴趣蛋白质。

15.如权利要求13或14之方法，其中该细胞中之重组蛋白质表达比未减少rDNA沉默之细胞增加，该增加较佳为20％至100％，更佳为20％至300％，最佳大于20％。

16.如权利要求13至15之方法，其中步骤b)包含敲低或敲除核仁重建复合物(NoRC)之一种组分且步骤c)包含过表达转录因子。

17.如权利要求13或16之方法，其中该转录因子为上游结合因子(UBF)。

18.如权利要求16之方法，其中该NoRC组分为TIP-5或SNF2H，以TIP-5较佳。

19.如权利要求13至16任一之方法，其中敲低TIP-5并过表达UBF。

20.一种产生用于生产重组蛋白质之宿主细胞的方法，包含

a.提供一种细胞，

b.减少该细胞中之核糖体RNA基因(rDNA)沉默，

c.藉由增加转录因子之表达来增加该细胞中之核糖体RNA转录，

d.视需要选择单一细胞克隆，及

e.获得宿主细胞。