[发明专利]从样品的一或多种杂质中纯化靶蛋白的方法有效
| 申请号： | 201080035153.X | 申请日： | 2010-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN102574911A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | N·索伊斯;D·哈伯德;Y·张;J·哈姆齐克 | 申请（专利权）人： | 米利波尔公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K17/00 |
| 代理公司： | 永新专利商标代理有限公司 72002 | 代理人： | 左路;林晓红 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 样品 多种 杂质 纯化 蛋白 方法 | ||
1.从样品的一或多种杂质中纯化含Fc区域的靶蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)使所述样品接触亲和色谱介质；
(b)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述亲和介质洗脱；
(c)使洗脱液接触阳离子交换色谱介质；
(d)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述阳离子交换色谱介质洗脱；
(e)使洗脱液接触阴离子交换色谱介质；和
(f)回收所述含Fc区域的靶蛋白，
其中所述方法在步骤(b)和(c)之间以及步骤(d)和(e)之间不需要存储罐。
2.从样品的一或多种杂质中纯化含Fc区域的靶蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a)使所述样品接触亲和色谱介质；
(b)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述亲和介质洗脱；
(c)使洗脱液接触阳离子交换色谱介质；
(d)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述阳离子交换色谱介质洗脱；
(e)使洗脱液接触阴离子交换色谱介质；和
(f)回收所述含Fc区域的靶蛋白，
其中所述方法在步骤(b)和(c)之间以及步骤(d)和(e)之间不需要缓冲液交换步骤。
3.从样品的一或多种杂质中纯化含Fc区域的靶蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a)使所述样品接触亲和色谱介质；
(b)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述亲和介质洗脱；
(c)使洗脱液接触阳离子交换色谱介质；
(d)将所述含Fc区域的靶蛋白从所述阳离子交换色谱介质洗脱；
(e)使洗脱液接触阴离子交换色谱介质；和
(f)回收所述含Fc区域的靶蛋白，
其中所述方法在步骤(b)和(c)之间以及步骤(d)和(e)之间不需要存储罐和缓冲液交换步骤。
4.权利要求3的方法，其中所述方法还包括步骤(a)和(b)之间的预洗脱步骤。
5.权利要求3的方法，其中所述含Fc区域的靶蛋白选自抗体、免疫粘附分子和Fc融合蛋白，及其含Fc的片段。
6.权利要求5的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
7.权利要求3的方法，其中所述步骤(d)包括使用pH范围为2.0-4.0的缓冲液。
8.权利要求4的方法，其中所述预洗脱步骤包括使所述亲和介质接触阳离子交换色谱缓冲液。
9.权利要求1的方法，还包括步骤(c)和(d)之间的病毒灭活步骤。
10.权利要求9的方法，其中所述病毒灭活步骤包括使所述阳离子交换色谱介质与pH小于4.0的缓冲液接触适合于病毒灭活的一段时间。
11.权利要求10的方法，其中所述时间的范围为15-60分钟。
12.权利要求10的方法，其中所述缓冲液的电导率为5-50mS。
13.权利要求3的方法，其中所述步骤(d)包括使用pH范围为5.0-9.0的缓冲液。
14.权利要求3的方法，其中所述步骤(d)包括使用具有pH范围为6.0-8.0的缓冲液。
15.权利要求3的方法，其中所述步骤(b)包括使用电导率在5-50mS范围的缓冲液。
16.权利要求3的方法，其中所述步骤(b)包括使用电导率在12-25mS范围的缓冲液。
17.权利要求3的方法，其中所述亲和色谱介质包含蛋白A或其功能性变体。
18.用于从样品的一或多种杂质中纯化含Fc区域的靶蛋白的试剂盒，所述试剂盒包含以下一或多种：亲和色谱介质、阳离子交换色谱介质、阴离子交换色谱介质和一或多种洗脱缓冲液，以及无需存储罐和/或缓冲液交换步骤而使用所述试剂盒的说明书。
19.权利要求18的试剂盒，其中所述一或多种介质装在柱中。
20.权利要求19的试剂盒，其中所述柱是一次性柱。
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