[发明专利]arNOX跨膜蛋白超家族9(TM9SF)的克隆与表达及其方法和应用

权利要求书

1.一种非天然存在的重组DNA分子，包含编码可溶性老化相关NADH氧化酶(arNOX)多肽或其酶学活性片段的部分，所述部分包含编码蛋白——所述蛋白包含选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17的氨基酸序列——的核苷酸序列或者包含在严格条件下与前述序列之一杂交的核苷酸序列，并且其中所述杂交序列编码同工型的arNOX家族的老化相关标志蛋白。

2.被转化或转染以包含权利要求1的重组DNA分子的分离的宿主细胞。

3.权利要求2的分离的宿主细胞，其为细菌细胞。

4.权利要求3的分离的宿主细胞，其中所述细菌细胞为大肠杆菌细胞。

5.权利要求2的分离的宿主细胞，其中所述细胞为真核细胞。

6.权利要求2的分离的宿主细胞，其中所述细胞为哺乳动物细胞。

7.权利要求6的分离的宿主细胞，其中所述细胞为COS细胞。

8.权利要求5的分离的宿主细胞，其中所述细胞为酵母细胞。

9.一种用于在宿主细胞中重组产生arNOX活性蛋白或多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a.用载体感染或转化分离的宿主细胞以产生重组宿主细胞，所述载体包含在所述宿主细胞中有活性的启动子和所述arNOX多肽的编码区，其中所述arNOX蛋白或多肽包含选自由氨基酸序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17确定的跨膜超家族9成员1a、1b、2、3和4的氨基酸序列，所述启动子与所述编码区可操作地连接；并且

b.在所述arNOX蛋白或多肽被表达的条件下培养所述重组宿主细胞。

10.一种用于确定哺乳动物中老化状态和arNOX同工型组成的方法，所述方法包括以下步骤：

a.提供生物样本；并且

b.检测所述生物样本中编码一种或多种老化相关的arNOX蛋白的核糖核酸分子的存在情况，其中所述检测步骤是使用在严格条件下的杂交或使用其中需要引物与模板的完全匹配的聚合酶链式反应进行，此时杂交探针或引物基本上由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：9给出的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸组成；

其中所述核糖核酸分子在生物样本中的存在指示arNOX表达。

11.一种抗体制剂，其与选自以SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17给出的氨基酸序列或者SEQ ID NO：2的氨基酸56-87、SEQ ID NO：2的氨基酸548-568、SEQ ID NO：6的氨基酸73-104、SEQ ID NO：8的氨基酸55-88或SEQ ID NO：10的氨基酸53-84表征的蛋白的抗原特异性结合。

12.一种用于确定哺乳动物中arNOX同工型组成的方法，所述方法包括以下步骤：

a.提供来自哺乳动物的生物样本；

b.使步骤a)所述的生物样本与对至少一种arNOX蛋白特异性的可检测抗体在允许所述抗体与arNOX蛋白结合的条件下接触；并且

c.当所述对arNOX蛋白特异性的可检测抗体被结合时，检测生物样本中至少一种与老化相关疾病有关的arNOX同工型的存在情况。

13.一种可有效改善哺乳动物中老化相关疾病的免疫原组合物，所述组合物包含至少一种SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、14、15、16或17给出的arNOX蛋白或多肽；

或者具有SEQ ID NO：2的氨基酸548-568、SEQ ID NO：2的氨基酸57-87、SEQ ID NO：6的氨基酸73-104、SEQ ID NO：8的氨基酸55-88或SEQ ID NO：10的氨基酸53-84给出的氨基酸序列的肽。