[发明专利]检测棘白菌素化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测棘白菌素化合物的方法。

背景技术

棘白菌素(pneumocandins)是具有脂类侧链的抗真菌环状六肽(参见Schwarts等人，1992年，Journal of antibiotics，第45卷，第12期，第1853-1866页；Masurekar等人，1992年，Journal of Antibiotics，第45卷，第12期，第1867-1874页；Hensens等人，1992年，Journal of Antibiotics，第45卷，第12期，第1875-1885页；Schmatz等人，1992年，Journal of Antibiotics，第45卷，第12期，第1886-1891页；以及Adefarati等人，1992年，Journal of Antibiotics，第45卷，第12期，第1953-1957页；以及美国专利US 5,021,341)。

棘白菌素类的抗真菌活性与抑制1，3β-葡聚糖类的生物合成有关。1，3β-葡聚糖合成酶(一种多亚单位酶)的作用与真菌细胞壁构建、分割隔膜沉积、及子囊孢子壁装配有关。已在模型酵母(酿酒酵母和粟酒裂殖酵母)中以及在致病性真菌(例如念珠菌、曲霉菌、隐球菌和肺囊虫属)中鉴定出此酶复合体的催化亚单位，一种整合膜蛋白。(Curr Drug Targets Infect Disord.2001年8月；1(2)：159-69，由Liu和Balasubramanian发表)。

棘白菌素类和棘白菌素衍生物可用作活性药物成分(API)和/或制造活性药物成分的中间体。包含该活性药物成分的药物可用于真菌感染相关疾病的治疗性或预防性处理。

例如，活性药物成分卡泊芬净(Caspofungin)是棘白菌素B₀的半合成衍生物。卡泊芬净(商品名为)适用于成人及儿童患者(年龄为3个月以上)的：

·发热性粒细胞缺乏患者中的假定真菌感染的经验性治疗。

·念珠菌血症及以下念珠菌感染的治疗：腹腔内脓肿、腹膜炎和胸腔感染。

·食管念珠菌感染的治疗。

·用其它疗法难治疗或对不其它治疗方法不耐受的患者的侵袭性曲霉菌病的治疗。

因此，出于药物安全性和药效的原因，需要高纯度的活性药物成分。

棘白菌素B₀可以用作制造卡泊芬净的起始原料。在制造卡泊芬净的期间，棘白菌素C₀被看作是杂质。因此，理想的是检测并控制棘白菌素B₀的含量及棘白菌素C₀的含量。

棘白菌素B₀经常是通过对真菌Glarea lozoyensis(早先被分类为Zalerion arboricola)进行发酵而制造，但在发酵过程中会同时产生许多具有类似理化性质的异构体和衍生物。

棘白菌素B₀与棘白菌素C₀是异构体，两者的差别仅在于脯氨酸残基上的一个羟基的位置不同：

棘白菌素B₀                         棘白菌素C₀

化学文摘登录号：135575-42-7        化学文摘登录号：144074-96-4

已知数种用于检测棘白菌素的方法。然而，这些方法通常较为麻烦而且对于棘白菌素B₀的选择性检测或者棘白菌素C₀的选择性检测而言是低效的。例如，结晶法和反相色谱法不能从棘白菌素C₀分离棘白菌素B₀。采用乙酸乙酯/甲醇/水作为流动相的正相色谱法能够从棘白菌素C₀分离棘白菌素B₀。然而，此方法的缺点是棘白菌素在装载溶液中的溶解度低以及稳定性略低。此外，此流动相并不十分适用于质谱法，从而限制了该方法对于分析目的的有用性。

相关现有技术

J Mass Spectrom.2007年4月：42(4)：440-9，由Rochat等人发表。利用液相色谱-串联质谱法检测血浆中的卡泊芬净。

Rapid Commun Mass Spectrom.2004年；18(23)：2871-7，由Egle等人发表。用于卡泊芬净全自动分析的液相色谱法双柱切换技术(LC-LC)/电喷雾电离串联质谱法。