[发明专利]使用副粘病毒载体的经鼻喷雾型结核疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及使用副粘病毒载体的经鼻喷雾型结核疫苗，特别涉及使用人的副流感病毒2型病毒载体(hPIV2)的经鼻喷雾型结核疫苗。

背景技术

结核是由属于分枝杆菌属的人型结核菌(结核分枝杆菌，Mycobacterium tuberculosis)引起的感染症。即使在现在，结核也是导致大量感染者的疾病之一。在全世界，每年有800万人患结核病，约200万人死亡。这是由于现有的结核疫苗BCG(Bacille de Calmette et Guerin：卡介菌)疫苗对成人不具有效果，因此，在婴幼儿期的疫苗接种只在年轻时得到预防结核效果，即使追加接种，也不能诱导对成人的预防结核效果。另外，在日本，每年产生2万人以上的结核病患者(约20名患者/10万人)，成为中等流行国家。

在结核预防中使用的BCG疫苗以牛型结核菌(牛分枝杆菌，Mycobacterium bovis)为原型。通过将牛型结核菌经过长时间传代培养，失去对人的毒性，将仅残留抗原性的细菌作为BCG疫苗使用。由对人体接种该活菌而获得免疫，进行对人型结核菌的感染防御。BCG疫苗是现在被实用化的唯一的结核预防疫苗，婴幼儿结核的预防效果得到广泛认可。

BCG疫苗的效果在十余年左右丧失，在成人后，通过自然免疫力的增加防止结核的发生。但是，依靠自然免疫力不能充分抑制成人结核的发病。对于该事态，可以考虑在成人后再接种BCG疫苗的方法，但是，已知BCG疫苗对成人结核的效果低(或几乎无效)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开公报2002/066055

专利文献2：日本特开2008-074749号公报

非专利文献

非专利文献1：第52届日本病毒学会学术集会，M蛋白欠損パラインフルエンザ2型ウイルス(PIV2)及びマウスIL-4を揷入したPIV2の性状解析，2004年11月21日

发明内容

发明所要解决的课题

对于上述事态，进行了若干种成人结核疫苗的开发。例如，进行了MVA85A疫苗(在安卡拉痘苗病毒中表达抗酸杆菌85A抗原的疫苗)、Aeras402疫苗(在35型腺病毒中表达85A抗原和TB10.4的疫苗)和M72F(别名GSK TB101：是由GSK(Glaxo Smith Kline)公司开发的疫苗，是将结核分枝杆菌的蛋白质和GSK公司的AS02佐剂共同使用的疫苗)等的开发。但是，至今仍没有得到具有充分效果的成人结核疫苗。

本发明是鉴于上述事实而作出的，其目的在于提供在结核预防中具有效果的经鼻喷雾型疫苗。

用于解决课题的方法

hPIV2是属于副粘病毒科的病毒，其基因组是约15000碱基的单链负链RNA。在该核酸结合核衣壳蛋白(NP)，形成螺旋对称的核苷蛋白质复合体(核衣壳，RNP)。编码病毒基因组的蛋白质中，M蛋白与病毒糖蛋白的细胞质内区域、被膜脂质双层膜和RNP相互作用，在病毒颗粒的出芽中是重要的。通过基因重组使M蛋白缺失的病毒基因组虽然感染细胞，表达特定的病毒蛋白质，但不能出芽。本发明的发明人发现，使M蛋白缺失的PIV2能够作为用于在标的细胞表达外来蛋白质的载体使用(非专利文献1)。

另一方面，本发明的发明人发现抗酸杆菌来源的α抗原在过敏性疾病的预防、治疗中是有效的(专利文献1)。构建在CMV启动子和TPA信号肽的下游中重组入有α抗原的表达载体pcDNA-α-K，在哮喘小鼠模型中进行验证。另外，发现：为了有效地使用α抗原，作为表达量多的载体，使用PIV2，对过敏性疾病是有效的(专利文献2)。

本发明的发明人在研究上述技术在结核疫苗中是否能够应用时，吃惊地发现，在现有的方法中，几乎得不到效果的结核菌感染预防，在使M蛋白质或F蛋白质缺损的hPIV2(rhPIV2)中重组入有α抗原的表达载体显示结核预防效果，从而基本完成了本发明。

这样，第1发明涉及的经鼻喷雾型结核疫苗，特征在于：在使M基因、F基因或HN基因缺损的副粘病毒基因中重组入有抗酸杆菌来源的α抗原(Ag85B)、其类似物、编码具有与它们同样的功能的它们的突变体(以下称为“α抗原等”)的基因。

另外，第2发明涉及的结核预防或治疗方法，特征在于：在使M基因、F基因或HN基因缺损的副粘病毒基因中重组入有抗酸杆菌来源的α抗原、其类似物、编码具有与它们同样的功能的它们的突变体的基因，对包括人的哺乳动物进行喷雾且经鼻给药。