[发明专利]用于抗原提取过程的方法和装置

说明书

背景

诊断细胞成像使用多种方法，通过这些方法，可使细胞或组织产生的分子特异定位到那些细胞或组织。这给研究者提供那些所给分子的产生或活性的部位方面的信息。对于常规病理学中蛋白的特异定位，常规利用称为免疫组织化学(IHC)的程序。在IHC中，将用于特异抗原的抗体施加到识别已知特异分子的固定组织样品作为第一步骤。然后用已与酶(如辣根过氧化物酶)化学偶合的第二抗体检测此抗体。在用显色底物(如二氨基联苯胺(DAB))培养后，在已于关注蛋白的特异部位结合到第一抗体的第二抗体部位产生有色沉积。此程序目前用于临床病理学实验室中超过200种抗体，在研究环境中多更多。

组织处理的性质需要样品在嵌入石蜡和在切片机上微切片之前“固定”，以产生适用于免疫染色的组织切片。在此过程期间，用产生保持组织细胞特征的化学交联的甲醛处理保存蛋白。甲醛主要通过使蛋白中的伯胺基与蛋白或DNA中的其它邻近氮原子通过-CH2-键交联而保存或固定组织或细胞。然而，组织固定的过程经常掩盖对诊断和预测目的所期望检测的特异蛋白上的抗原。为了检测单个靶分子，一般使程序最佳化，并且在需要时，为了检测另外的靶分子，以不同方式处理连续切片。随着检测单一样品中多种抗原的能力的提高，需要与检测多种蛋白相容的一致的组织处理。

简述

第一方面，本发明提供甲醛固定的组织样品的抗原提取的方法，所述方法包括以下步骤：在大于90℃的温度在第一抗原提取溶液中培养甲醛固定的组织样品，将组织样品转移到第二抗原提取溶液，并在大于90℃的温度在第二抗原提取溶液中培养组织样品。

第二方面，本发明提供用于提取甲醛固定的组织样品中的抗原的试剂盒，所述试剂盒包含提取样品中至少一部分未提取抗原的第一抗原提取溶液，和提取样品中至少一些另一部分未提取抗原的第二抗原提取溶液。

第三方面，本发明提供用于进行抗原提取方法的样品处理装置，所述样品处理装置包含样品处理子系统、试剂分配子系统和信号检测子系统。

附图

当参考附图阅读以下详细描述时，本发明的这些和其他特征、方面和优点将变得更好理解，其中在全部附图中相同的符号代表相同的部件：

图1为用于使甲醛固定的组织样品与抗原提取溶液接触的代表性样品处理装置。

图2为显示与一步程序比较用二步程序的增强染色的单色显微相片(在20X或63X放大倍数)。

图3显示单色显微相片(在20X放大倍数)，其显示在BrCA肿瘤的多元分析FISH中用二步程序的增强染色。

图4为人工二步抗原提取方法与自动方法比较的定量分析结果的条形图。

图5显示在通过人工二步抗原提取方法或两种自动抗原提取方法之一制备的样品上对抗原-S6染色的漂白作用的单色显微相片(在20X放大倍数)。

详述

为了更清楚和简要地描述和指出要求保护的本发明的主题，对在以下说明及其所附权利要求中使用的具体术语提供以下定义。

定义

“抗体”是指特异结合到另一个分子的特定空间和极性组织从而定义为与所述特定空间和极性组织互补的免疫球蛋白。抗体可以为单克隆或多克隆，并且可通过在本领域公知的技术制备，例如宿主的免疫和血清的收集(多克隆)，或者通过制备连续杂交细胞系，并收集分泌的蛋白(单克隆)，或者通过克隆和表达核苷酸序列或其诱变处理的变种，至少对天然抗体的特异结合所需的氨基酸序列编码。抗体可包括完全免疫球蛋白或其片段，这些免疫球蛋白包括不同种类和同种型，如IgA、IgD、IgE、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM。功能抗体片段可包括能够保持以相似亲合力结合到全长抗体的抗体部分(例如，Fab、Fv和F(ab′)₂或Fab′)。另外，在适当时，可使用免疫球蛋白或其片段的聚集体、聚合物和缀合物，只要实质保持对特定分子的结合亲合力。

“抗原”是指可结合抗体或抗体片段的物质。抗原可以为内源性，由此使它们由于正常或异常细胞代谢或由于病毒或胞内细菌感染在细胞内产生。内源性抗原包括异种(异源)、自体和个体基因型或同种(同源)抗原。抗原也可以为肿瘤特异抗原或由肿瘤细胞展现。在此情况下，将它们称为肿瘤特异抗原(TSA)，一般产生于肿瘤特异突变。抗原也可以为由肿瘤细胞和正常细胞展现的肿瘤相关抗原(TAA)。抗原也包括CD抗原，CD抗原是指由白细胞表达的任何一些细胞-表面标记，并且可用于区分细胞谱系或发育阶段。这些标记可通过特异单克隆抗体识别，并且通过它们的分化簇编号。