[发明专利]启动子的增强子及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种启动子的增强子及其用途。

背景技术

为了治疗针对淋巴细胞的各种疾病(例如白血病和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染)，一直以来需要建立针对淋巴细胞的基因治疗的技术。本发明人已从人类疱疹病毒-6(HHV-6)(一种疱疹病毒)中发现了作为将期望基因导入淋巴细胞的启动子的HHV-6B MIE启动子，并且提交了其专利申请(专利文件1)。

这种病毒启动子可以单独使用，但理想的是与增强子联合使用以增强其作用。

在这方面，就真核启动子而言，已知各种内含子具有增强子的功能。然而，就病毒(如疱疹病毒)的启动子而言，对内含子的增强子功能尚未有充分了解。

已知巨细胞病毒(CMV)启动子在淋巴细胞中的活性较差。尽管使用了专利文件2的增强子，但该活性在除CHO细胞以外的细胞中是否增加是未知的。

专利文件1：国际公布第2007/029712号

专利文件2：日本PCT国家阶段公开公布第2008-536506号

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种用于病毒启动子的增强子，例如在免疫活性细胞或血细胞(如淋巴细胞等)中能够选择性地且强烈地诱导表达的启动子。

本发明的发明人意外地发现：用于HHV-6B的主要立即早期基因(MIE)的内含子具有这种增强子活性，由此解决上述问题。

重要的是，甚至所有的内含子不具有增强的表达效果，但新近已发现了具有这种效果的内含子。同样重要的是，即使大部分以往的研究是针对真核生物，但本发明人揭示了HHV-6的内含子(至少对于HHV-6特别是HHV-6B是第一次)并且其效果是显著的。

已知巨细胞病毒(CMV)启动子在淋巴细胞中的活性较低。即使使用了专利文件2的增强子，但在除CHO细胞外的细胞中该活性是否会增加是未知的。尽管在淋巴细胞中活性增加，但是这种增加并非总是有利的，这是因为最初的活性较低。在这方面，6MIE启动子本身显示了比来自于T细胞系(如Molt-3、Jurkat和SupT1)的培养细胞中的巨细胞病毒启动子更高的活性。此6MIE启动子与本发明增强子的联合使用使活性进一步增加。此外，发现这种组合的启动子活性比巨细胞病毒启动子的活性至少高5倍。因此，期望可以以特定方式更有效地将外源基因导入淋巴细胞中。

因此，本发明说明书提供以下项目。

(1)一种启动子的增强子，包含：用于人类疱疹病毒-6(HHV-6，Human Herpes Virus-6)的主要立即早期基因(MIE，Major Immediate Early gene)的内含子序列(在下文中称为HHV-6B)、或者该内含子序列的片段。

(2)根据第1项所述的启动子的增强子，其中所述内含子序列包含：基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的至少-12至+1292的序列(SEQ IDNo.2)、或者该序列的片段。

(3)根据第1项或第2项所述的启动子的增强子，其中所述序列包含基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的-12至+262的序列(SEQ ID No.3)。

(4)根据第1项至第3项中任一项所述的启动子的增强子，其中所述序列是基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的-12至+262的序列(SEQ IDNo.3)。

(5)根据第1项至第4项中任一项所述的启动子的增强子，其中所述启动子包含基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的至少-382至-983的序列(SEQ ID No.4)、或者该序列的片段。

(6)一种具有改善的活性的启动子，包含：人类疱疹病毒-6(HHV-6)的主要立即早期基因(MIE)的内含子序列或者该序列的片段、以及启动子。

(7)根据第6项所述的具有改善的活性的启动子，所述启动子还包含：基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的至少-12至+1292的序列(SEQ ID NO.2)或该序列的片段、以及MIE启动子。

(8)根据第7项所述的具有改善的活性的启动子，其中所述主要立即早期基因启动子包含：基于上述6MIE序列中所包含IE1的转录起始点的至少-382至-983的序列(SEQ ID No.4)、或者该序列的片段。