[发明专利]产生抗甲基化DNA抗体的杂交瘤及其利用

说明书

【技术领域】

本发明涉及产生抗甲基化DNA抗体的杂交瘤、由该杂交瘤产生的单克隆抗体、及使用该抗体将甲基化DNA免疫沉降的方法。

【背景技术】

在高等真核生物的染色体DNA中，构成DNA的碱基之中胞嘧啶(C)的5位有被甲基化修饰的情况。此高等真核生物中的DNA的甲基化作为遗传信息的表达抑制结构发挥功能。例如，包括多个某基因的启动子区域中常见的CpG序列的区域(也称为“CpG岛”或“CG岛”)被甲基化时，其基因的转录被抑制。对此，CpG岛不被甲基化时，启动子区域可结合转录因子，因此该基因成可转录的状态。

如此，DNA的甲基化是基因表达的控制结构之一。因此，DNA的甲基化在初期胚发生、组织特异性的基因的表达、作为哺乳动物中特征性的现象的基因印迹或X染色体的失活、染色体的稳定化、DNA复制的时机等的各种各样的生理的、病理性的现象中发挥重要的作用。

再者近年越来越明了在癌或其他疾病中涉及DNA的甲基化。因此，进行对于基于各种各样的基因的甲基化的解析的癌的确定诊断或预后预测等。

作为用于DNA的甲基化解析而回收甲基化DNA的方法之一，知甲基化DNA免疫沉降法(methylation DNA Immunoprecipitaion：MeDIP法)。在MeDIP法中，使用特异性地识别甲基化DNA的抗体或甲基化DNA结合蛋白质将甲基化DNA免疫沉降，可浓缩样品中包括的甲基化DNA。另外知，通过使用将此MeDIP法和微阵列解析技术组合的MeDIP-芯片法，可一并解析DNA的甲基化状态。

可在这样的MeDIP法中使用的抗甲基化DNA抗体，至今有各种的抗体市售，例如，常使用识别5-甲基胞嘧啶或5-甲基胞苷的抗体。另外，在特开2003-125766号公报(专利文献1)中记载，将5-甲基-2’-脱氧胞苷作为抗原使用而制备杂交瘤，从此杂交瘤得单克隆抗体，通过使用该抗体的酶联免疫吸附法(ELISA法)可定量5-甲基-2’-脱氧胞苷。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：特开2003-125766号公报

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

对通过MeDIP法得到的DNA进行甲基化DNA解析时，优选在该MeDIP法中由抗甲基化DNA抗体的甲基化DNA的回收量及浓缩率高。

但是，使用结合能差的抗甲基化DNA抗体对DNA含有量少的样品实施MeDIP法时，由于无法回收甲基化DNA解析中必要并且充分的量的甲基化DNA，有该解析的灵敏度降低的担忧。另外，使用特异性劣的抗甲基化DNA抗体实施MeDIP法时，由于得到的DNA中的非甲基化DNA含有量变多，有甲基化DNA解析的信赖性降低的担忧。

从而，为了通过MeDIP法更提高甲基化DNA的回收量及浓缩率，期望对甲基化DNA有优良的结合能及特异性的抗甲基化DNA抗体的开发。

本发明鉴于如上述一样的事实，旨在提供对甲基化DNA有优良的结合能及特异性的产生抗甲基化DNA抗体的杂交瘤。

另外，本发明旨在提供使甲基化DNA的回收量及浓缩率中优良的MeDIP法可能的抗甲基化DNA抗体。

再者，本发明旨在提供使用上述的抗甲基化DNA抗体的，甲基化DNA的回收量及浓缩率优良的MeDIP法。

【解决课题的技术方案】

本发明人关注于将以下的式(I)：

【化1】

所示的，5’-(5-甲基-2’-脱氧胞苷-3’-磷酸)-2’-脱氧鸟苷3’-磷酸(以下，也称为“5-甲基-dCpdGp”)作为抗原使用。然后，用包含5-甲基-dCpdGp的抗原免疫动物，将从该动物得到的抗体产生细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合而制备杂交瘤，发现从此杂交瘤得到有对甲基化DNA优良的结合能及特异性的抗甲基化DNA抗体，从而完成本发明。

即，根据本发明，提供将从用包含5-甲基-dCpdGp的抗原免疫的动物得到的抗体产生细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合而得到的杂交瘤(以下，也称为“本发明的杂交瘤”)。

另外，根据本发明，提供由上述的杂交瘤产生的单克隆抗体、及使用该抗体将甲基化DNA免疫沉降的方法。

【发明效果】

由本发明的杂交瘤可得有对甲基化DNA、特别是甲基化CpG序列优良的结合能及特异性的抗甲基化DNA抗体。另外，通过使用得到的抗体进行MeDIP法，相比使用以往的抗甲基化DNA抗体时更可显著地升高甲基化DNA的回收量及浓缩率。

【附图说明】