[发明专利]加载DNA的载体上的金纳米颗粒、其制备方法及用途

权利要求书

1.加载DNA的载体上的金纳米颗粒，其特征在于所述加载DNA的载体上的金纳米颗粒具有图2A中曲线2中所示的锐利边缘。

2.如权利要求1所述的加载DNA的载体上的金纳米颗粒，其中所述载体选自碳质材料、含氮材料、硫、含磷材料、细胞材料和生命物质。

3.如权利要求1所述的加载DNA的载体上的金纳米颗粒，其中载体优选为碳质。

4.如权利要求1所述的加载DNA的载体上的金纳米颗粒，用于穿透细胞壁，优选用于基因递送。

5.制备加载DNA的载体上的金纳米颗粒的方法，其中包括步骤：

[a]将能够合成细胞内金纳米颗粒的微生物培养物接种于营养培养基中并培养以获得生物质；

[b]收获步骤[a]中获得的生物质，随后在无菌条件下用无菌蒸馏水洗涤所述生物质；

[c]将步骤[b]中获得的经洗涤的生物质悬浮于HAuCl₄溶液中并孵育2-3天，随后在无菌条件下用无菌蒸馏水洗涤所述生物质；

[d]将步骤[c]中获得的经洗涤的生物质在管式炉中在惰性条件下热处理6-8小时以获得热处理的碳金HTC-600Au；

[e]用乙醇洗涤步骤[d]中获得的HTC-600Au；

[f]将乙醇洗涤的无菌HTC-Au-600与悬浮于XHO缓冲液(基于Tris.Cl，NaC的缓冲液)中的DNA混合；

[g]用亚精胺和PEG顺序平衡步骤[f]中获得的混合物，随后在2.5M CaCl₂中超声处理；

[h]以12000rpm离心步骤[g]中获得的超声处理的混合物并用无水乙醇洗涤沉淀两次，最后在所需体积的乙醇中重悬以获得加载DNA的载体上的金纳米颗粒。

6.如权利要求5所述的方法，其中微生物优选自施氏假单胞菌AG 259 ATCC 17588、海藻希瓦氏菌、鲍氏织线藻UTEX485、大肠杆菌DH5α、荚膜红细菌、棒状杆菌p.SH09、芽孢杆菌属、乳酸菌属、轮枝菌属(AAT-TS-4)(ATCC.16312)、单端孢霉属、V.luteoalbum、赭曲霉和黄曲霉。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述微生物优选为对应于ATCC 18500的赭曲霉ITCC 6436。

8.如权利要求5所述的方法，其中HAuCl₄溶液的浓度优选为10^-3摩尔。

9.如权利要求5所述的制备加载DNA的载体上的金纳米颗粒的方法，优选在碳质载体上，其中包括步骤：

(i)在含麦芽糖-葡萄糖-酵母提取物和蛋白胨肉汤的培养基中接种对应于ATCC 18500的赭曲霉ITCC 6436的真菌孢子；

(ii)使孢子在37℃下三天以萌发而产生菌丝，以获得收获的生物质，随后在无菌条件下用热压处理的MilliQ水洗涤所述生物质；

(iii)在HAuCl₄溶液中重悬步骤(ii)中获得的生物质，随后在37℃下孵育两天，随后用MilliQ水洗涤；

(iv)将步骤(iii)中获得的生物质在氮气流下在管式炉中600℃下热处理6小时以获得产物HTC-600Au；

(v)用乙醇洗涤步骤(iv)中获得的HTC-600Au并与悬浮于XHO缓冲液(基于Tris.Cl，NaC的缓冲液)中的DNA混合；

(vi)用亚精胺和PEG顺序平衡步骤(v)中获得的混合物，随后在2.5M CaCl₂中超声处理；

(vii)以12000rpm离心步骤(vi)中获得的超声处理的混合物并用无水乙醇洗涤沉淀两次，最后在所需体积的乙醇中重悬以获得负载在碳质载体上的加载DNA的金纳米颗粒。

10.基本上如本文中参照说明书所附的实施例和附图所述的加载DNA的载体上的金纳米颗粒、其制备方法及其用途。