[发明专利]临床前测试免疫调节药物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及测试用于T-细胞活化的预期或已知免疫调节药物的方法，包括以下步骤：在体外使外周血单核细胞(PBMC)培养物与预定量的所述预期或已知免疫调节药物接触；以及当与所述预期或已知免疫调节药物接触时，使用读出系统观察用于T-细胞活化的所述PBMC培养物，其中调节PBMC预培养物的细胞密度使得所述PBMC能够细胞-细胞接触，并且其中培养所述PBMC预培养物至少12h。本发明进一步涉及在体外测试减弱细胞因子风暴的药物的方法。

在本说明书中，引用了包括专利申请和厂家手册在内的许多文献。在不考虑这些文献公开的内容与本发明的可专利性相关的情况下，将其公开的全部内容在此都以引用的方式并入本文。尤其是，以引用的方式并入的所有引用文献的程度与将各个单独的文献具体地且单独地指出将以引用的方式并入的程度是相同的。

背景技术

在两种系统中临床前评价调节淋巴细胞活性的免疫治疗药物：动物模型，通常为啮齿动物，并且如果可能，为灵长类动物；和人外周血单核细胞(PBMC)的培养物。

通常使用PBMC，这是因为，首先，它们包含所有亚型的淋巴细胞和单核细胞，其次，它们可以很容易地从健康供体或从患者抽取的静脉血中得到。对这些PBMC的体外刺激被认为是预期免疫调节药物的体内活性的有用指示剂。

某些T-细胞活化剂，尤其是针对T-细胞抗原受体(TCR)的单克隆抗体(mAb)，例如，OKT3(第一个用于临床免疫抑制的mAb)，诱发促炎细胞因子的系统性释放(Abramowicz等，1989)。它们中最危险是TNF、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-2。在接受mAb治疗的患者中，这种细胞因子释放综合征或“细胞因子风暴”的控制通常通过高剂量的皮质类固醇治疗来实现。

TGN1412是对通过人T-细胞表达的共刺激分子CD28具有特异性的lgG4亚类的人源化单克隆抗体(mAb)。由于与典型的CD28-特异性mAb不同，所以它被称作“CD28超拮抗剂”(CD28SA)，在没有T-细胞抗原受体(TCR)的协同作用的情况下它可以活化T-淋巴细胞(Hunig，2007)。TGN1412由现已不存在的TeGenero AG，Würzburg开发。

2006年3月13日，在伦敦的Northwick Park医院由独立的Parexel临床试验单位(Clinical Trial Unit)进行的第一次人体试验中，对健康人类志愿者静脉施用100μ/kg体重的TGN1412，导致了威胁生命的细胞因子释放综合征，只有将志愿者转移到医院的重症监护室后才控制住这种症状(Suntharalingam等，2006)。

由赞助者TeGenero AG提供的临床前研究显示，在使用鼠-CD28-特异性超拮抗剂的类似鼠模型中以及在接受比人类志愿者高至50倍剂量的自身TGN1412的猕猴中，没有发现所述“细胞因子风暴”的证据(Duff，2006)。此外，向人PBMC的培养物中加入TGN1412也没有导致细胞因子释放。所有关键的猴子和PBMC培养物试验由代表政府专家科学组行动的英国国家生物学标准和控制协会(British National Institute for Biological Standards and Control，NIBSC)在I期临床试验中重复进行，并证实了TGN1412在这些体系中的无毒特性(Duff，2006)。在TGN1412试验失败后三年，仍没有澄清为什么这种体外试验没有对人类志愿者经历的细胞因子风暴作出警告。

在注射CD28SA以后，啮齿动物和猕猴没有释放有毒的系统性细胞因子，显然是由于完整免疫系统对这种药剂的反应性的种间差异造成的，并且已经给出了针对这种差异的具体意见(Gogishvili等，2009；Nguyen等，2006；Schraven和Kalinke，2008)。

这些发现表明，由于物种特异性反应模式不同，即使灵长类动物模型对于人类对新药的反应性来说也不总是安全的预测者。

人类具有大约10¹²个T-淋巴细胞，在任何给定时刻在血液中循环的淋巴细胞还不到上述的百分之一。因此，培养的PBMC没有应答TGN1412，或者是由于与位于淋巴组织中的那些细胞(在志愿者中明显以细胞因子释放应答)相比在这些细胞中的功能缺陷导致的，或者是由于存在于淋巴器官中而不是血液中的细胞类型对TGN1412介导的T-淋巴细胞的活化的要求导致的。

因此，急需在TGN1412细胞培养试验中再现在伦敦人类志愿者中观察到的细胞因子风暴以了解其机制并测试其对药理学抑制的敏感性。