[发明专利]用两个或多个表面特性进行颗粒和/或细胞分离的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用两个或多个表面特性进行颗粒和/或细胞分离的方法。本发明的应用领域为医学和药学。

背景技术

从复杂液体(如血液)中对颗粒、特别是体细胞和病原体进行识别和分离是研究、诊断和疾病治疗中的必要步骤。根据不同的特异密度对颗粒进行分离(例如，分离白细胞和红细胞)，使用离心方法或过滤器就足以胜任。随着对疾病的病原和免疫原研究的进步，存在越来越多的需要，即，对特异密度相同、但功能不同的细胞进行识别和分离。淋巴细胞的不同功能例如可以通过在外部细胞膜上的典型结构表达来体现(例如通过所谓的分化抗原——CD)。相对于这些结构会生成抗体，该抗体是用于多种特异分离方法的决定性工具。近十年来，使用荧光激分离法和磁性分离法来完成这类任务，不久前，Pluriselect公司(德国)又提供了一种由捕获颗粒辅助的筛分法。

本方法实现了，以简单的方式，从复杂液体中分离细胞，该细胞在细胞膜特征上互不相同。除了另外的、在细胞群落里另外分布的、表现为其它功能的表面特征(B、C…)以外，功能不同的细胞通常具有同样的表面特征(A)。对只具有所需的特征A、B或C结合的细胞的分离，一如既往地对生物学研究提出了挑战。目前，只能凭借荧光激活细胞分选术(FACS)根据多重标记实现该目的。FACS无疑是分离细胞的首选方案，但是它有较高的设备和人员要求。该技术的另外的缺陷在于对分离的细胞的强应激反应，需要复杂的无菌操作以及高数量的活细胞的挑选，这些缺陷决定了对于方法的限制。

发明内容

通过由磁性分离法和通过捕获颗粒辅助的分离法构成的、新型的结合方案实现了本发明的目的。该目的通过权利要求1-9实现。

具体实施方式

例如，要从血液中分离出具有特征A、B和C的细胞。从这些表面特征的数量可以得出7种不同的组合(A、B、C、AB、AC、ABC、BC)。

通过相对于A、B和C使用特异抗体实现了该目的。在该实施例中，将相对于A的抗体偶联到直径为40μm的颗粒上，将相对于B的抗体偶联到直径为20μm的颗粒上，将相对于C的抗体偶联到直径为＜10μm的可磁化颗粒上。

步骤1：

用识别系统A和C将血样预培养10分钟。然后，添加识别系统B，再培养10分钟。接着，将血样用级联筛过滤，该级联筛具有两个筛号分别为40μm和20μm的筛子，并进行充分清洗。

40μm的筛子阻挡住了：A、AB、AC、ABC

20μm的筛子阻挡住了：B、BC

流出物：C

步骤2：

对三种血样进行磁性分离：

40μm级份分为：A、AB和AC、ABC

20μm级份分离为均质级份：B和BC

流出物的级份分离为均质级份：C

步骤3：

通过已知的方法将级份A、AB和AC、ABC与捕获颗粒A分开。还进行了与B的共培养。然后通过20μm的筛子分离血样。

在筛子上保留了：AB和ABC

流出物为：A和AC

步骤4：

对两个级份进行磁性分离，这会导致分离出均质级份：AC和ABC，以及A和AB。

该方法可以以较大的细胞数、较小耗费、在短时间内、以及不造成细胞应激反应的条件下进行。本领域技术人员可以通过对磁性和尺寸限定的捕获颗粒进行适宜组合，得到广泛的组合方案。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种用两个或多个表面特性进行颗粒和/或细胞分离的方法，所述方法由颗粒辅助分离法和磁性分离法相结合构成，其中，使含有颗粒或细胞的混合物依次地或同时地

与表面特性A的捕获颗粒，

与表面特性B的捕获颗粒，以及

必要时，与表面特性C的捕获颗粒，

以及必要时的其它特性进行培养，

其中，捕获颗粒具有不同的大小或者是可磁化的，接着通过筛膜进行分离或进行磁性分离法，并且接着在必要时进行继续处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，可磁化的捕获颗粒小于不可磁化的捕获颗粒。

3.根据权利要求1至3所述的方法，其特征在于，对不可磁化的捕获颗粒的分离通过筛膜进行。