[发明专利]用于评估作为疾病早期标志物的糖形的凝集素测定

权利要求书

1.用于制备对岩藻糖基化蛋白具有高亲和力的凝集素的方法，所述方法包括：

a.获得含有至少一个针对L-岩藻糖或L-岩藻糖-连接的寡糖的结合位点的凝集素；

b.在至少一个所述结合位点中使凝集素突变；和

c.富集所述突变的凝集素，其中所述凝集素具有对岩藻糖基化蛋白提高的结合亲和力。

2.权利要求1的方法，其中所述凝集素为AAL。

3.权利要求1的方法，其中所述突变通过随机诱变来进行。

4.权利要求1的方法，其中所述突变通过定点诱变来进行。

5.权利要求1的方法，其中所述提高的结合亲和力针对所述岩藻糖基化蛋白上的外臂或核心L-吡喃岩藻糖基连接。

6.权利要求5的方法，其中所述连接选自α1-2外臂L-吡喃岩藻糖基连接、α1-3外臂L-吡喃岩藻糖基连接、α1-4外臂L-吡喃岩藻糖基连接、核心α1-6L-吡喃岩藻糖基连接及其组合。

7.权利要求1的方法，其中所述凝集素获自细菌。

8.权利要求1的方法，其中所述富集通过镍色谱来进行。

9.权利要求1的方法，其中所述凝集素还与10个或更多个组氨酸残基连接。

10.权利要求1的方法，其中所述凝集素还与报告分子连接。

11.用于区分两种或更多种糖蛋白同工型的方法，所述方法包括：

a.获取含有糖蛋白的样品；

b.使所述糖蛋白与权利要求1的重组凝集素结合，其中所述凝集素对糖蛋白同工型具有高亲和力并且其中所述凝集素与报告分子连接；和

c.检测所述报告分子的存在情况，存在所述报告分子表明存在所述同工型。

12.权利要求11的方法，其中所述重组凝集素为与10个或更多个组氨酸残基符合读框连接的重组AAL。

13.权利要求11的方法，其中所述重组凝集素为具有与c-末端符合读框连接的10个或更多个组氨酸残基并且在第129或224位具有天冬酰胺或谷氨酰胺的用于检测所述同工型的重组AAL。

14.权利要求13的方法，其中所述同工型具有α-1，6连接的岩藻糖残基。

15.权利要求14的方法，还具有在以下位点中的至少一个突变：结构域2中的R24A、E36A、R77A、结构域2中的E898A、结构域4中的R179A、结构域4中的E191A及其组合。

16.用于检测患者疾病的方法，所述方法包括：

a.从含有岩藻糖基化糖形靶蛋白的患者获取血清样品；

b.使权利要求1的重组凝集素与具有岩藻糖基化糖形的靶蛋白结合；

c.检测岩藻糖基化糖形的存在情况，其中存在的岩藻糖基化糖形的量改变表明存在疾病。

17.权利要求16的方法，其中所述疾病为癌症。

18.权利要求16的方法，其中所述重组凝集素为与10个或更多个组氨酸残基符合读框连接的重组AAL。