[发明专利]AAD-1事件DAS-40278-9的检测

权利要求书

1.一种用于确定玉米植物的接合性的方法，所述植物包含AAD-1玉米事件DAS-40278-9，所述事件包含转基因构建体，所述转基因构建体包含AAD-1基因，所述转基因构建体的侧翼为5’侧翼玉米基因组DNA和3’侧翼玉米基因组DNA，所述方法包括：

获得来自所述玉米植物的基因组DNA的DNA样品；

通过将所述DNA样品与下述接触来产生接触的样品：

a.第一事件引物和第二事件引物，其中所述第一事件引物特异性结合所述转基因构建体，所述第二事件引物特异性结合所述5’玉米基因组侧翼DNA或所述3’玉米基因组侧翼DNA，且其中所述第一事件引物和所述第二事件引物，当置于TAQMAN PCR条件下时，产生事件扩增子

b.参照正向引物和参照反向引物，其当置于TAQMAN PCR条件下时，产生来自内源玉米参照基因的参照扩增子

c.荧光事件探针，其与所述事件扩增子杂交

d.荧光参照探针，其与所述参照扩增子杂交；

将所述接触的样品置于基于荧光的终点TAQMAN PCR条件下；

对杂交于所述事件扩增子的所述荧光事件探针进行定量；

对杂交于所述参照扩增子的所述荧光参照探针进行定量；

将杂交的荧光事件探针的量与杂交的荧光参照探针的量相比较；和

通过比较杂交的荧光事件探针和杂交的荧光参照探针的荧光比来确定DAS-40278-9的接合性。

2.权利要求1的方法，其中所述扩增子由50-100个残基组成。

3.权利要求1的方法，其中所述5’侧翼DNA包含SEQ ID No：29的残基1-1873，并且所述3’侧翼DNA包含SEQ ID No：29的残基6690-8557。

4.权利要求1的方法，其中所述转基因构建体由SEQ ID No：29的残基1874-6689组成。

5.权利要求1的方法，其中所述参照基因是内源玉米(Zea mays)转化酶基因。

6.权利要求1的方法，其中所述第二事件引物结合SEQ ID No：29的残基1673-1873或其互补物。

7.权利要求1的方法，其中所述第二事件引物结合SEQ ID No：29的残基6690-6890。

8.权利要求1的方法，其中所述方法用于将所述事件育种渐渗入另一玉米品系。

9.权利要求8的方法，其中所述另一玉米品系缺乏所述事件。

10.权利要求1的方法，其中所述事件扩增子为73个碱基对。

11.权利要求1的方法，其中所述参照基因包含选自下组的序列或与选自下组的序列杂交：SEQ ID No：5，SEQ ID No：6和SEQ ID No：7。

12.权利要求1的方法，其中所述参照引物包含SEQ ID No：5和SEQ ID No：6，并且所述参照探针包含SEQ ID No：7。

13.权利要求1的方法，其中所述探针用荧光染料和淬灭剂标记。

14.权利要求13的方法，其中所述事件探针包含在所述事件探针5’端处的作为所述荧光染料的FAM，和在所述事件探针3’端的MGB淬灭剂。

15.权利要求1的方法，其中所述参照扩增子是由所述引物扩增的79个碱基对片段。

16.权利要求13的方法，其中所述参照探针用HEX在所述参照探针的5’端并用Black Hole Quencher 2(BHQ2)在所述参照探针的3’端标记。

17.权利要求1的方法，其中所述事件扩增子由SEQ ID No：8组成，并且所述参照扩增子由SEQ ID No：9组成。

18.权利要求1的方法，其中所述事件探针包含SEQ ID No：4。

19.权利要求1的方法，其中所述事件引物选自下组：SEQ ID No：2和SEQ ID No：3。

20.权利要求1的方法，其中所述方法的结果直接在读板器中读取。

21.权利要求1的方法，其中所述DNA样品从田间的玉米植物获得。