[发明专利]用于生产糖基化免疫球蛋白的方法

说明书

本文报道在细胞中生产免疫球蛋白的领域的方法，从而可以基于培养条件修饰所生产的免疫球蛋白的糖基化模式。。

发明背景

近年来免疫球蛋白的生产稳定增加并且在不久的将来，免疫球蛋白可能将成为多种疾病治疗可用的治疗法的最大组别。免疫球蛋白的影响源自其特异性，所述特异性包括其特异性的靶识别和结合功能以及与抗原/Fc受体结合的同时或之后特定效应的活化。

特异性的靶识别和结合由免疫球蛋白的可变区介导。产生效应的免疫球蛋白分子的其他部分是翻译后修饰，例如糖基化模式。翻译后修饰对免疫球蛋白的效力、稳定性、免疫原性潜力、结合等确实具有影响。在此，必须提及依赖于补体的细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和诱导凋亡。

已报道免疫球蛋白的糖基化模式，即附着的糖基结构的糖组成和数量对生物学性质具有强烈影响(参见例如Jefferis，R.，Biotechnol.Prog.21(2005)11-16)。由哺乳动物细胞生产的免疫球蛋白含有以质量计2-3％的碳水化合物(Taniguchi，T.等人，Biochem.24(1985)5551-5557)。例如，在G类免疫球蛋白(IgG)中，这等价于在小鼠来源的IgG中的2.3个寡糖残基(Mizuochi，T.等人，Arch.Biochem.Biophys.257(1987)387-394)和在人来源的IgG中的2.8个寡糖残基(Parekh，R.B.等人，Nature 316(1985)452-457)，其中一般地两个位于Fc区而剩余的位于可变区(Saba，J.A.等人，Anal.Biochem.305(2002)16-31)。

在G类免疫球蛋白的Fc区中，能够通过在297位的氨基酸残基的N-糖基化引入寡糖残基，所述氨基酸残基是天冬酰胺残基(被标注为Asn²⁹⁷)。Youings等人展示在15％至20％的多克隆IgG分子的Fab区中存在其他N-糖基化位点(Youings，A.等人，Biochem.J.，314(1996)621-630；还参见例如，Endo，T.等人，Mol.Immunol.32(1995)931-940)。由于非均一的(即不对称的)寡糖加工，存在具有不同糖基化模式的免疫球蛋白的多种同种型(Patel，T.P.等人，Biochem.J.285(1992)839-845；Ip，C.C.等人，Arch.Biochem.Biophys.308(1994)387-399；Lund，J.等人，Mol.Immunol.30(1993)741-748)。寡糖的结构和分布都同时是高度可重现的(即，非随机的)和位点特异性的(Dwek，R.A.等人，J.Anat.187(1995)279-292)。