[发明专利]用于以阵列状配置动物细胞的基板的制造方法以及以阵列状配置有动物细胞的基板的制造方法

说明书

相关申请的相互参照

本申请主张2009年10月30日申请的日本特愿2009-250516号的优先权，其全部记载特别地合并于此作为公开。

技术领域

本发明涉及用于以阵列状配置动物细胞的基板的制造方法，以及使用该方法的以阵列状配置有动物细胞的基板的制造方法。

背景技术

尝试以逐个的水平确定、选择细胞，并使用所选择的细胞。例如，对分别检出逐个淋巴细胞的抗原特异性、进而回收所检出的一个抗原特异性淋巴细胞、使用所回收的一个抗原特异性淋巴细胞，例如制造抗体进行了研究(专利文献1)。

专利文献1中，为了检出抗原特异性淋巴细胞，而使用微孔阵列芯片。该微孔阵列芯片中，各微孔的形状及尺寸具有一个微孔仅容纳一个淋巴细胞的形状及尺寸。

已知若在基板表面培养动物细胞则称为细胞外基质的粘接蛋白质在细胞外形成，将细胞附着在基板表面。已知将如此附着在基板表面上的细胞剥离而利用。作为剥离方法，也已知利用电刺激(专利文献2～4)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1 日本特开2004-173681号公报

专利文献2 日本特开2008-295382号公报

专利文献3 日本特开2005-312343号公报

专利文献4 日本特开平10-42857号公报

专利文献1～4的全部记载特别地合并于此作为公开。

发明内容

但是，利用细胞外基质实现的细胞对基板表面的附着、通过电刺激进行的细胞的剥离未用作将动物细胞分别逐个地配置在基板表面上的技术方案。

本发明的目的在于提供不使用微孔就可以将动物细胞分别逐个地配置在基板表面上的新的技术方案。

本发明人为了达成上述目的而进行各种研究，结果发现，通过细胞外基质的吸附和利用细胞外基质的部分性的电刺激进行的剥离，可以形成可以个别附着动物细胞的培养基板，从而完成本发明。

本发明如下所述。

[1] 用于以阵列状配置动物细胞的基板的制造方法，含有：

(1) 准备在电极基板表面上以阵列状具有吸附用表面的基板的步骤，

(2) 在上述基板的电极表面及吸附用表面上吸附细胞外基质的步骤，和

(3) 对上述电极施加微弱电位，将电极表面的细胞外基质剥离，而得到在吸附用表面上吸附有细胞外基质的基板的步骤。

[2] 以阵列状配置有动物细胞的基板的制造方法，含有：

(1) 准备在电极基板表面上以阵列状具有吸附用表面的基板的步骤，

(2) 在上述基板的电极表面及吸附用表面上吸附细胞外基质的步骤，

(3) 对上述电极施加微弱电位，将电极表面的细胞外基质剥离，而得到在吸附用表面上吸附有细胞外基质的基板的步骤，和

(4) 在步骤(3)中得到的基板表面上培养动物细胞，得到在吸附用表面上附着有动物细胞的基板的步骤。

[3] [1]或[2]中记载的制造方法，其中，阵列状的各吸附用表面的尺寸为在一个吸附用表面上可以附着一个动物细胞的尺寸。

[4] [1]～[3]中任意一项记载的制造方法，其中，上述基板选自非导电性的有机材料和无机材料。

[5] [1]～[3]中任意一项记载的制造方法，其中，上述基板为玻璃、塑料或陶瓷。

[6] [1]～[4]中任意一项记载的制造方法，其中，步骤(3)中的上述微弱电位在－0.4V～－0.2V或＋0.2V～＋0.5V(相对于Ag/AgCl(vs.Ag/AgCl))的范围。

[7] [2]～[6]中任意一项记载的制造方法，其中，步骤(4)中的动物细胞的培养在对上述电极施加－0.4V～－0.2V(相对于Ag/AgCl)范围的电位、抑制动物细胞对于上述电极的附着的同时进行。

[8] [2]～[6]中任意一项记载的制造方法，其中，步骤(4)中的动物细胞的培养以对上述电极施加正电位、在上述电极上附着动物细胞的方式进行，得到在吸附用表面及电极上附着有动物细胞的基板。

根据本发明，可以形成可以个别附着动物细胞的培养基板，若使用该培养基板则也可以将动物细胞分别逐个地配置在基板表面上。

附图说明

[图1] 表示实施例1中的电极制造顺序的说明图。

[图2] 表示步骤(2)～(4)的说明图。

[图3] 表示使用FITC标记胶原蛋白 I作为细胞外基质蛋白质时的图案电极表面的图像。