[发明专利]病毒细胞嗜性的识别

说明书

技术领域

本发明涉及表征病毒细胞嗜性的方法，尤其是人类免疫缺陷病毒（HIV），特别是能够利用CXCR4和CCR5受体而进入细胞的HIV病毒。

背景技术

HIV病毒进入细胞涉及几种病毒蛋白，包括包膜蛋白gp41和gp120。HIV病毒复制周期的第一步涉及病毒通过gp120蛋白与CD4细胞蛋白的相互作用与辅助T4淋巴细胞结合。此外，为了使病毒和细胞膜发生融合，HIV病毒需要与细胞共受体相互作用。体内最重要的共受体为趋化因子CXCR4和CCR5的受体。不同共受体的利用与免疫缺陷的时间依赖性变化并从而与感染有关：在感染开始时，所谓的R5病毒与CCR5共受体相互作用，并且随后在稍后阶段，某种病毒（所谓的X4病毒）利用CXCR4共受体。在此阶段，病毒群包括R5和X4病毒的混合物，或具有双R5/R4嗜性的病毒。在某些情况下，病毒R5可直接诱导AIDS的发生，然而X4病毒的出现通常与该疾病的发展有关。因此必须能够尽早检测患者中X4病毒的出现。

因此，已经开发了一定数量的方法，其目的在于测定HIV病毒的细胞嗜性。

例如，TROFILE测试（MONOGRAM）是一种由Monogram Biosciences和Pfizer提出的HIV病毒的表型测试。首先，构建含有编码患者HIV病毒包膜的区域的载体库。随后将这些载体扩增并在表达无任何包膜蛋白的HIV病毒和表达荧光素酶基因的载体中克隆该编码包膜的区域。最后，从使用这些载体中获得的重组病毒来感染表达CD4和CCR5或CXCR4的细胞。通过测量由荧光素酶产生的光发射来测定病毒感染这些细胞的能力。该测试具有几个缺点，如2007年11月由TRT-5向Afssaps（法国保健品安全署，French Agency for the Safety of Health Products）和HAS“Haute Autoritéde la Santé”发出的通知。首先，其具有非常高的成本。此外，接收结果的时间为四至五周，这并不适应于在治疗变化情况下的快速决策。此外，在该时间内，某些患者中可能发生病毒嗜性的变化。此外，不能提供HIV-2型病毒的特征测试（profile test）。

因此，需要简单、快捷、可靠且廉价的替代测试以测定HIV病毒的细胞嗜性。本发明的目的是提供这样的测试。

发明内容

本发明产生于发明人的意外发现，即，在可能感染了HIV病毒的细胞中，miRNA表达的调节取决于HIV病毒为进入细胞所利用的共受体。

因此，本发明涉及识别微RNA或其靶mRNA的体外方法，在病毒为了进入细胞而利用细胞受体和至少一种细胞共受体感染细胞的过程中，根据病毒为其进入细胞所利用的细胞共受体对所述微RNA或其靶mRNA的表达进行特异性改变，该方法包括：

i）在第一病毒利用第一共受体和至少一种其他病毒利用另一种共受体分别感染后，测定待测细胞中表达受体、第一共受体和至少一种其他共受体的微RNA的表达水平；

ii）识别该微RNA，相对于未感染细胞中的表达水平，在感染过程中所述微RNA的表达水平受到每一种病毒的调节；

iii）比较由此识别的微RNA；

iv）选择微RNA，其表达水平的改变对于共受体的利用是特异性的；

v）可选地识别由此选择的微RNA的靶mRNA。

本发明还涉及在感染病毒的患者中识别病毒所利用的细胞共受体的体外方法，所述病毒利用细胞受体和至少一种细胞共受体进入细胞，该方法包括：

i）使来自可能包含病毒的患者的样本与待测细胞接触，所述待测细胞表达病毒的细胞受体和病毒的至少一种细胞共受体；

ii）测定待测细胞中至少一种miRNA和/或miRNA的至少一种靶mRNA的表达水平；

iii）将该表达水平与预定值进行比较；

iv）由此推断病毒是否利用了待测细胞所表达的细胞共受体。

具体实施方式