[发明专利]来自中国仓鼠的糖基转移酶以及相关方法

说明书

本申请要求于2009年11月11日提交的美国临时专利申请序列号61/260,232的优先权，其全部披露内容通过引用结合在此。根据37CFR 1.52(e)(5)，将处于文本文件形式的序列表（名称为“序列表.txt”，产生于2010年11月10日，41千字节）以其全部内容通过引用结合在此。

发明背景

末端半乳糖-α1,3-半乳糖聚糖（在此称为Gal-α-Gal）可能是对N-糖基化蛋白的一种功能结果性修饰，当提供在异源衍生的生物学治疗剂上时，在人体中产生它的潜在免疫原性。在内源性蛋白质上的这种碳水化合物表位的存在显得是高度种类特异性的，例如在猪、小鼠、以及大鼠体内检测出，但是在灵长类体内不存在。因此，该表位可以存在于从某些生物体（例如，小鼠NS0或SP/2细胞，转基因猪）得到的细胞表达系统中产生的重组生物制品上。单克隆抗体西妥昔单抗是一个这样的在小鼠衍生的细胞系中产生的商业性蛋白质药物产品的实例，并且还报道含有Gal-α-Gal碳水化合物表位（Chung等人（2008）《新英格兰医学杂志》（N Engl J Med）358:1109-1117)。Gal-α1,3-Gal聚糖的酶促生物合成被归因于1,3糖基转移酶-1（在此称为Ggta1）（Taylor等人（2003）《糖生物学》（Glycobiology）13:327-337；Smith等人（1990）《生物化学期刊》（J Biol Chem）265:6225-6234)。

发明内容

本发明是至少部分地基于在CHO细胞自其衍生的中国仓鼠（Cricetulus griseus）以及用于重组蛋白质生产的CHO细胞系两者中的α-1,3糖基转移酶-1(Ggat1)基因序列的发现。因此，本发明涉及与发现的基因相关的核酸和多肽组合物、以及相关的载体和细胞（例如，被基因工程化以降低、消除或增加Ggta1活性的CHO细胞以及用于产生这类细胞的载体）。此外，本发明涉及鉴定的序列在各种方法中的用途，例如检测CHO细胞中的Ggta1活性（包括Ggta1转录活性和/或酶活性）的方法，例如用于针对产生Gal-α-Gal结构的能力筛选CHO细胞，或用于鉴定和定量CHO细胞（例如用于产生治疗性糖蛋白的细胞）中的Ggta1的表达或活性。

在此披露的Ggta1序列列于表1中：

因此，在一个第一方面，本发明的特征是一种分离的核酸分子，该分子包括编码中国仓鼠或CHO细胞Ggta1多肽、或它的具有一种或多种Ggta1活性（例如在此所述的一种Ggta1活性）的一个活性部分的核苷酸序列。

在一个实施方案中，该分离的核酸分子包括与（a）具有编码SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7的氨基酸残基序列的序列的DNA分子或（b）（a）的DNA分子的互补物具有至少大约75%序列一致性、或至少大约80%序列一致性、或至少大约85%序列一致性、或至少大约90%序列一致性、或至少大约91%序列一致性、或至少大约92%序列一致性、或至少大约93%序列一致性、或至少大约94%序列一致性、或至少大约95%序列一致性、或至少大约96%序列一致性、或至少大约97%序列一致性、或至少大约98%序列一致性、或至少大约99%序列一致性的核苷酸序列。该分离的核酸分子可以编码具有一种或多种Ggta1活性的一种多肽。在一个实施方案中，该分离的核酸分子包括SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7的序列。

在一个实施方案中，该分离的核酸分子与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3、SEQID NO:5或SEQ ID NO:6的序列具有至少大约90%序列一致性、或至少大约91%序列一致性、或至少大约92%序列一致性、或至少大约93%序列一致性、或至少大约94%序列一致性、或至少大约95%序列一致性、或至少大约96%序列一致性、或至少大约97%序列一致性、或至少大约98%序列一致性、或至少大约99%序列一致性。该分离的核酸分子可以编码具有一种或多种Ggta1活性的一种多肽。

在一个实施方案中，该分离的核酸分子在高严紧条件下与包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列的核酸分子杂交。

在一个实施方案中，该分离的核酸分子包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列。