[发明专利]使用二维cDNA文库的基因表达解析方法

权利要求书

1.一种基因表达谱的解析方法，其特征在于，包括：

（a）使样品中的待测核酸与二维地分布且固定在支持体上的核酸探针杂交的步骤，

（b）合成具有与待测核酸的序列互补的序列的cDNA，在该支持体上制备二维cDNA文库的步骤，

（c）使用二维cDNA文库，检测样品中的基因表达的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，样品含有多个细胞，对每个细胞解析基因表达谱。

3.根据权利要求1或2所述的方法，样品含有多个细胞，解析每个细胞的基因表达谱，比较细胞间的基因表达谱。

4.根据权利要求1～3中任意一项所述的方法，样品为活体组织样品，在保存有构成活体组织样品的细胞的二维位置信息的状态下，制备二维cDNA文库。

5.根据权利要求1～3中任意一项所述的方法，样品为活体组织样品，在保存有构成活体组织样品的细胞的内部的二维位置信息的状态下，制备二维cDNA文库。

6.根据权利要求4或5所述的方法，活体组织样品为组织切片样品，通过使该组织切片样品中的待测核酸移动到支持体，使其与核酸探针杂交。

7.根据权利要求6所述的方法，待测核酸向支持体的移动是通过电泳进行的。

8.根据权利要求1～7中任意一项所述的方法，样品为二维地保持有各个细胞的阵列。

9.根据权利要求1～8中任意一项所述的方法，待测核酸选自由信使RNA（mRNA）、非编码RNA（ncRNA）和DNA、以及它们的片段组成的组。

10.根据权利要求9所述的方法，待测核酸为mRNA，核酸探针为含有多聚T序列的DNA探针。

11.根据权利要求1～10中任意一项所述的方法，支持体为选自薄片、膜、凝胶薄膜、毛细管板和珠子组成的组中的至少1种。

12.根据权利要求1～11中任意一项所述的方法，支持体具有二维地划分而成的多个微细空间。

13.根据权利要求12所述的方法，微细空间的间隔比细胞的尺寸小。

14.根据权利要求12或13所述的方法，二维cDNA文库是cDNA被保持在支持体的二维地划分而成的多个微细空间中的文库。

15.根据权利要求1～14中任意一项所述的方法，还包含如下步骤：使保持在二维cDNA文库中的cDNA或其互补链拷贝移动至第2支持体，并使其与二维地分布且固定在第2支持体上的、具有与该cDNA或其互补链拷贝片段互补的序列的核酸探针杂交，从而制备第2二维cDNA文库。

16.根据权利要求1～15中任意一项所述的方法，还包含如下步骤：生成与保持在二维cDNA文库中的cDNA对应的核酸片段，在保持有二维cDNA文库的二维位置信息的状态下，使该核酸片段移动至第2支持体，从而制备第2二维cDNA文库。

17.根据权利要求16所述的方法，与cDNA对应的核酸片段含有cDNA的互补序列。

18.根据权利要求16所述的方法，与cDNA对应的核酸片段含有cDNA的互补序列和与cDNA的序列没有关联的已知序列。

19.根据权利要求1～18中任意一项所述的方法，使对检测对象的基因为特异性的标记核酸探针与保持在二维cDNA文库中的cDNA杂交，基于其标记检测基因表达。

20.根据权利要求19所述的方法，标记为荧光标记或化学发光标记。

21.根据权利要求1～18中任意一项所述的方法，使对检测对象的基因为特异性的核酸探针与保持在二维cDNA文库中的cDNA杂交，进行该核酸探针中所含的核酸序列的扩增反应，基于其扩增产物检测基因表达。

22.根据权利要求21所述的方法，扩增反应为聚合酶链反应（PCR）。

23.根据权利要求1～18中任意一项所述的方法，使对检测对象的基因为特异性的核酸锁式探针与保持在二维cDNA文库中的cDNA杂交，通过连接反应使已杂交的锁式探针形成环状的探针，以该环状探针为模板，进行滚环扩增（RCA）反应，基于其扩增产物检测基因表达。