[发明专利]在巴斯德毕赤氏酵母中生产缺乏与针对宿主细胞抗原的抗体的可检测交叉结合活性的蛋白质的方法

权利要求书

1.一种在巴斯德毕赤氏酵母中生产重组糖蛋白的方法，所述重组糖蛋白缺乏与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性，所述方法包括：

（a） 提供重组巴斯德毕赤氏酵母宿主细胞，其不展现对于N-聚糖或O-聚糖的β-甘露糖基转移酶2活性，不展现对于N-聚糖或O-聚糖的选自β-甘露糖基转移酶1活性和β-甘露糖基转移酶3活性的至少一种活性，并且其包括编码所述重组糖蛋白的核酸分子；

（b） 在对表达所述重组糖蛋白有效的条件下在培养基中生长所述宿主细胞；和

（c） 从所述培养基中回收所述重组糖蛋白，以产生缺乏与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性的重组糖蛋白。

2.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞不展现对于N-聚糖或O-聚糖的β-甘露糖基转移酶2活性、β-甘露糖基转移酶1活性和β-甘露糖基转移酶3活性。

3.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞进一步不展现对于N-聚糖或O-聚糖的β-甘露糖基转移酶4活性。

4.权利要求1的方法，其中与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性在夹心ELISA中测定。

5.权利要求1的方法，其中与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性在Western印迹中测定。

6.权利要求1的方法，其中所述重组糖蛋白是治疗性糖蛋白。

7.权利要求5的方法，其中所述治疗性糖蛋白选自由促红细胞生成素（EPO）；细胞因子例如干扰素α、干扰素β、干扰素γ和干扰素ω；以及粒细胞-集落刺激因子（GCSF）；GM-CSF；凝血因子例如因子VIII、因子IX和人类蛋白质C；抗凝血酶III；凝血酶；可溶的IgE受体α链；免疫球蛋白例如IgG、IgG片段、IgG融合物和IgM；免疫粘附素和其他Fc融合蛋白，例如可溶的TNF受体-Fc融合蛋白；RAGE-Fc融合蛋白；白细胞介素；尿激酶；胃促胰酶；和脲胰蛋白酶抑制物；IGF-结合蛋白；表皮生长因子；生长激素释放因子；annexin V融合蛋白；血管抑素；血管内皮生长因子-2；骨髓祖代抑制因子-1；护骨素；α-1-抗胰蛋白酶；α-feto蛋白；DNase II；人类血纤蛋白溶解酶原的kringle 3；葡糖脑苷脂酶；TNF结合蛋白1；促滤泡激素；细胞毒T淋巴细胞相关抗原4– Ig；跨膜激活物和钙调节物和亲环蛋白配体；高血糖素样蛋白质1；和IL-2受体激动剂构成的组。

8.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞被遗传工程化以生产具有人类样N-聚糖的糖蛋白。

9.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞被遗传工程化以生产主要具有选自以下的N-聚糖的糖蛋白：Man₅GlcNAc₂、GlcNAcMan₅GlcNAc₂、GalGlcNAcMan₅GlcNAc₂、NANAGalGlcNAcMan₅GlcNAc₂、GlcNAcMan₃GlcNAc₂、GlcNAc_（1-4）Man₃GlcNAc₂、Gal_（1-4）GlcNAc_（1-4）Man₃GlcNAc₂和NANA_（1-4）Gal_（1-4）GlcNAc_（1-4）Man₃GlcNAc₂。

10.一种包含通过权利要求1的方法获得的一种或更多种重组糖蛋白的组合物。