[发明专利]用于均质、实时检测LAMP产物的序列特异性方法

权利要求书

1.用于在环介导的等温扩增反应过程中产生核酸信号延伸产物的方法，所述方法包括:

a)使核酸信号引物与核酸靶序列的区域杂交，其中所述靶序列包含至少一种在环介导的等温扩增反应过程中产生的自我互补的发夹结构，并且其中所述区域不位于发夹结构的环区域中;

b)使经杂交的核酸信号引物在核酸靶序列上延伸以产生第一信号延伸产物;和

c)检测所述第一信号延伸产物。

2.权利要求1的方法，其中所述第一信号延伸产物包含发夹结构。

3.用于在环介导的等温扩增反应过程中产生核酸信号产物的方法，所述方法包括:

a)使核酸信号引物与核酸靶序列区域杂交，其中所述靶序列包含至少一个在环介导的等温扩增反应过程中产生的自我互补的发夹结构;

b)使杂交的核酸信号引物在核酸靶序列上延伸以产生第一信号延伸产物，其中所述第一信号延伸产物包含发夹结构;

c)使核酸扩增引物与第一信号延伸产物的环区域杂交，并使杂交的核酸扩增引物在第一信号延伸产物上延伸以产生第二信号延伸产物，其中所述第二信号延伸产物是双链DNA并且缺少发夹结构;

d)使核酸信号引物与第二信号延伸产物杂交，使杂交的核酸信号引物在第二信号延伸产物上延伸以产生第三信号延伸产物，其中所述第三信号延伸产物在其5’端具有发夹结构;和

e)检测所述第二或第三信号延伸产物。

4.用于在环介导的等温扩增反应过程中产生核酸信号产物的方法，所述方法包括:

a)使核酸信号引物与核酸靶序列区域杂交，其中所述靶序列包含至少一个在环介导的等温扩增反应过程中产生的自我互补的发夹结构;

b)使杂交的核酸信号引物在核酸靶序列上延伸以产生第一信号延伸产物，其中所述第一信号延伸产物包含发夹结构;

c)使核酸扩增引物与第一信号延伸产物的环区域杂交，并使杂交的核酸扩增引物在第一信号延伸产物上延伸以产生第二信号延伸产物，其中所述第二信号延伸产物是双链的并且缺少发夹结构;

d)使核酸信号引物与第二信号延伸产物杂交，并使杂交的核酸信号引物在第二信号延伸产物上延伸以产生第三信号延伸产物，其中所述第三信号延伸产物是单链的并且在其5’端具有发夹结构;

e)使核酸信号引物与第三信号延伸产物杂交，并使杂交的核酸信号引物在所述第三信号延伸产物上延伸以产生第四信号延伸产物，其中所述第四信号延伸产物包含双链核酸;和

f)检测所述第四信号延伸产物。

5.权利要求1，2，3或4的方法，其中同时使用了两种或更多种靶序列或序列变体，并且其中使用了与所述两种或更多种靶序列杂交的两种或更多种核酸信号引物。

6.权利要求5的方法，其中所述两种或更多种靶序列是在相同的连续核苷酸序列或两个不同的核苷酸序列上存在的序列。

7.权利要求5的方法，其中所述两种或更多种靶序列或序列变体源自一种生物体或源自两种或更多种不同的生物体。

8.权利要求1，2，3，4或5的方法，其中实时检测所述第一、第二、第三或第四信号延伸产物。

9.权利要求1，2，3，4或5的方法，其中在封闭的管形式中检测所述第一、第二、第三或第四信号延伸产物。

10.权利要求1，2，3，4，5，8或9的方法，其中通过杂交探针检测所述第一、第二、第三或第四信号延伸产物。

11.权利要求10的方法，其中所述杂交探针是单核苷酸差异敏感探针。

12.权利要求11的方法，其中所述杂交探针是产生荧光的。

13.权利要求12的方法，其中所述杂交探针是分子信标。

14.权利要求1，2，3，4或5的方法，其中信号引物包含杂交区域和报告子区域，其中所述杂交区域与核酸靶序列的区域杂交，并且其中通过报告子区域检测所述第一、第二、第三或第四信号延伸产物。

15.权利要求14的方法，其中所述报告子基团产生荧光信号。

16.权利要求15的方法，其中所述报告子基团是荧光发夹。