[发明专利]用于制备液体中的细胞和/或颗粒的单元和装置以及用于显微镜分析的方法

说明书

本发明涉及在液体中含有的贴壁细胞或非贴壁细胞和/或颗粒的制备。

对于观察在液体中含有的生物细胞，制备单元在药物工业中是熟知的。例如，此类制备单元在来自公司Thermo Fisher Scientific Inc.，81 Wyman Street，Waltham，美国以名称“Shandon EZ Single Cytofunnel”是可得到的。该单元包括贮藏室、过滤卡(filter card)和光学载玻片。

对应的过滤卡由高吸收性材料制备，并在中心具有孔。通常，过滤卡与载玻片邻近排列，以使过滤卡的孔限定载玻片上的沉积区域。因此，该沉积区域被过滤卡的高吸收性材料围绕。

最初，将含细胞的液体保持在与载玻片分离的贮藏室中。在将制备单元放置在例如，“Shandon Cytospin 4 Cytocentrifuge”中的专用离心机后，并以一定的速度旋转制备单元时，旋转作用斜置制备单元，从而通过过滤卡中的孔，将含细胞的液体从贮藏室释放到载玻片上的沉积区域。一旦含细胞的液体达到沉积区域，该液体将通过过滤卡的高吸收性材料除去，将细胞留在载玻片的沉积区域。然后可以将玻璃板与制备单元分离并进一步用于细胞的显微镜观察。

尽管上述离心机可以同时处理12个制备单元，但期望的是更有效且高效的制备单元和/或制备装置。

因此，本发明的目的是提供用于高效地、可靠地且高质量地制备液体中含有的细胞和/或颗粒的制备单元、制备装置和方法。

根据本发明，该任务通过根据各个独立权利要求的制备单元、制备装置和方法解决。在从属权利要求中描述了根据本发明的制备单元和制备装置的其他实施方案。

具体而言，本发明涉及用于制备在液体中含有的细胞和/或颗粒的单元，其包括经配置用于储存含细胞和/或颗粒的液体，并在应用预定的外力，特别是离心力时，通过出口释放储存的含细胞和/或颗粒的液体的贮藏室。通道与贮藏室的出口邻近排列，贮藏室的出口通向通道。通道具有比出口的横截面更大的横截面。从出口过渡到通道处的壁形成了边缘。该单元还包括用于接收释放的含细胞和/或颗粒的液体的观察构件，以及在通道和观察构件之间与观察构件邻近排列的吸收装置(absorbing means)。该吸收装置具有孔，其允许含细胞和/或颗粒的液体通过孔流到观察构件上。该吸收装置还从观察构件上的含细胞和/或颗粒的液体中除去液体，以使细胞和/或颗粒留在观察构件上用于观察。根据本发明的制备单元是用于划算地、可靠地且高质量地制备细胞，特别是非贴壁细胞或者液体中原本含有的其他颗粒的小型且简单的单元。

在不需要应用任何额外的外力的情况下，抵抗作用于液体的重力，将液体以悬挂状态储存于贮藏室中。这通过粘附力和/或表面张力实现，所述粘附力和/或表面张力可以通过贮藏室或者其出口的合适形状有利地影响。因此，该液体可以可靠地维持在贮藏室中，从而防止在从贮藏室中释放液体前，该液体与吸收装置不受控制地接触。

此外，确保细胞和/或颗粒的小心处理。降低或者完全避免制备期间的损伤，导致了细胞死亡率和/或颗粒变形的减少。此外，避免了细胞的堵塞，从而对于多种制备物，提供了高度可重复的结果。在平行进行含细胞或者颗粒的多种液体的处理的情况下，如果通过多孔板提供多个制备单元，那么这是特别有利的。

此外，使用根据本发明的制备单元，可以在均一条件下，在贮藏室中维持的液体中沉淀细胞和颗粒。在释放具有细胞和颗粒的液体期间，该沉淀基本上保持不变。因此，分布在沉积区域上的所得细胞是非常均匀的。均匀分布是有利的，因为它们提供了好的观察条件，特别是对于自动图像分析。

作为实例，根据本发明的单元可以在药物工业中用于制备细胞和/或颗粒。

通过在贮藏室的出口处排列的边缘，借助于粘附力和/或表面张力，增强了贮藏室中液体的保留。因此，在没有应用额外的外力的情况下，液体可以以贮藏室的任一方向可靠地维持在贮藏室中。

对于非贴壁细胞与观察室的附着，离心处理是特别有利的，因为可以避免使用粘着性化学物。粘着性化学物具有风险，它们可能改变细胞的诱导状态，例如，通过与胞外基质蛋白质相互作用。

在根据本发明的单元的第一个实施方案中，出口和通道之间过渡处边缘的壁包括90度的角度。此种过渡是容易生产的。然而，其他形状的过渡也是可能的，例如交错形或者包括除90度以外的角度的边缘。