[发明专利]修饰的可变域分子及其生产和使用方法

权利要求书

1.一种分离的蛋白质，包括在选自下组的两个或更多个位置处包含一个带负电荷的氨基酸的一个抗体重链可变区(V_H)，该组由以下各项组成：根据Kabat的编号系统的28和/或31和/或32和/或33和/或35，该蛋白质能够特异性地结合到除了鸡蛋溶菌酶、β-半乳糖苷酶、α-淀粉酶、B5R之外的抗原上，或其中：

(i)如果该蛋白质结合到人血管内皮生长因子(VEGF)上并且在位置32和33处包括天冬氨酸，则它在位置29与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸；以及

(ii)如果该蛋白质结合到人VEGF上并且在位置31和33处包含天冬氨酸，则它在位置28与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸。

2.一种包括抗体重链可变区(V_H)的分离的蛋白质，该可变区在选自下组的位置处包括两个或更多个带负电荷的氨基酸，该组由以下各项组成：根据Kabat编号系统的28和/或31和/或32和/或33和/或35，该蛋白质能够以大于10μM的亲和力特异性地结合到一种抗原上，其中：

(i)如果该蛋白质结合到人血管内皮生长因子(VEGF)上并且在位置32和33处包括天冬氨酸，则它在位置29与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸；以及

(ii)如果该蛋白质结合到人VEGF上并且在位置31和33处包含天冬氨酸，则它在位置28与35之间的包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸。

3.一种包括根据Kabat的编号系统在位置28、33和/或35处包含一个带负电荷的氨基酸的抗体重链可变区(V_H)的一种分离蛋白，该蛋白能够特异性地结合到除了鸡蛋溶菌酶、β半乳糖苷酶、α淀粉酶、B5R之外的抗原上，或其中：

(i)如果该蛋白质结合到人血管内皮生长因子(VEGF)上并且在位置32和33处包括天冬氨酸，则它在位置29与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸；以及

(ii)如果该蛋白质结合到人VEGF上并且在位置31和33处包含天冬氨酸，则它在位置28与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸。

4.一种包括根据Kabat的编号系统在位置28、33和/或35处包含一个带负电荷的氨基酸的抗体重链可变区(V_H)的分离蛋白质，该蛋白质能够以大于10μM的亲和力特异性地结合到抗原上，其中：

(i)如果该蛋白质结合到人血管内皮生长因子(VEGF)上并且在位置32和33处包括天冬氨酸，则它在位置29与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸；以及

(ii)如果该蛋白质结合到人VEGF上并且在位置31和33处包含天冬氨酸，则它在位置28与35之间包括至少一个另外的带负电荷的氨基酸。

5.如权利要求2或4所述的分离蛋白质，其中该蛋白质能够以大于100nM的亲和力特异性地结合到一种抗原上。

6.如权利要求1至5的任一项所述的蛋白质，与在根据Kabat的编号系统的位置28和/或31和/或32和/或33和/或35处没有一个或多个带负电荷的氨基酸的蛋白质相比较，它具有降低的聚集倾向。

7.如权利要求1至5的任一项所述的蛋白质，与在根据Kabat的编号系统的位置28和/或31和/或32和/或33和/或35处没有一个或多个带负电荷的氨基酸的蛋白质相比较，它在加热到至少大约60℃之后具有降低的聚集倾向。

8.根据权利要求1至7的任一项所述的蛋白质，在加热到至少大约60℃之后它具有特异性地结合到抗原上的能力。

9.如权利要求7或8所述的蛋白质，在加热到至少大约80℃之后它具有降低的聚集倾向和/或特异性地结合到抗原上的能力。

10.如权利要求1至9的任一项所述的蛋白质，能够结合到一种人蛋白上。

11.如权利要求1至10的任一项所述的蛋白质，能够结合到与人类病症相关联或其成因的一种蛋白质上。

12.如权利要求1至11的任一项所述的蛋白质，其中在位置32处的带负电荷的氨基酸是谷氨酸。

13.如权利要求1至12的任一项所述的蛋白质，其中该带负电荷的氨基酸是天冬氨酸。