[发明专利]用于监测细胞状态和用于永生间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种监测细胞状态的方法，所述方法包括，针对所选择的由所述细胞分泌的microRNA（miRNA）种类，确定（a）所述miRNA种类的前体形式（前体miRNA）与（b）所述miRNA种类的成熟形式（成熟miRNA）之间的比例，其中如此建立的所述前体miRNA与成熟miRNA之间的比例指示所述细胞的状态。

2.权利要求1的方法，其中：（a）所述细胞被包含在细胞块、组织、器官或生物体中，并且所述前体miRNA与成熟miRNA之间的比例指示所述各个细胞块、组织、器官或生物体的状态；或者（b）所述miRNA种类被包含在由所述细胞分泌的外核体中，并且所述方法包括获得这类外核体并且从其中获得前体和成熟形式的所述miRNA种类，其中例如所述外核体是从生物体的样品中获得，所述生物体包括所述细胞，所述样品例如包括血样、血清样品、唾液样品或尿样。

3.权利要求1或2的方法，其中：（a）所述前体miRNA与成熟miRNA之间的比例是通过与包含核酸序列的阵列杂交来确定，所述核酸序列能够结合并区分前体和成熟形式的所述miRNA种类；或者（b）所述前体miRNA与成熟miRNA之间的比例是通过实时聚合酶链式反应（RT-PCR）来确定。

4.权利要求1、2或3的方法，所述方法包括针对多个所选择的miRNA种类确定包含多个前体miRNA与成熟miRNA之间的比例的谱，每个均指示所述细胞的状态，所述谱是通过与包含多个探针的阵列杂交来确定，所述探针能够结合并区分多个所选择的miRNA种类的前体和成熟形式。

5.前述权利要求任一项的方法，所述细胞的状态包括生理状态，例如细胞周期状态、分化状态、发育状态或代谢状态；或病理状态，例如疾病状态、人疾病状态、糖尿病状态、免疫障碍状态、神经退行性障碍状态、致癌状态、癌性状态或肿瘤状态。

6.一种方法：

（a）用于检测细胞状态的变化，所述方法包括检测所述细胞的前体miRNA与成熟miRNA之间比例（或包含这类比例的谱）的变化，其中这类变化指示所述细胞状态的变化；

（b）用于确定细胞在具体状态，所述方法包括比较所述细胞的前体miRNA与成熟miRNA之间比例（或包含这类比例的谱）与已知处于该具体状态的细胞的前体miRNA与成熟miRNA之间比例（或包含这类比例的谱）；

（c）监测生物体的状态，所述方法包括：从该生物体获得样品或者获得该生物体的样品，对所述样品实施前述权利要求任一项的方法，并且由籍此获得的所述前体miRNA与成熟miRNA之间比例确定所述生物体的状态；

（d）检测生物体的疾病，所述方法包括：从该生物体获得样品或者获得该生物体的样品，对所述样品实施前述权利要求任一项的方法，并且比较籍此获得的所述前体miRNA与成熟miRNA之间比例与已知患病生物体的或来自患病生物体的样品中前体miRNA与成熟miRNA之间比例；或

（e）治疗或预防生物体中的疾病，所述方法包括根据（d）检测生物体的疾病，并对所述生物体给予该疾病的治疗物。

7.前述权利要求任一项的方法，其中：（a）所述细胞包含间充质干细胞（MSC）；（b）所述细胞的状态包括未转化的状态和转化的状态，例如c-myc转化的状态；（c）所述microRNA包括hsa-let-7b microRNA（miRBase登录号：MI0000063）；或（d）转化状态中的所述比例是正常状态的2.8倍；或者上述的任意组合。

8.一种包含多个核酸序列的阵列，所述核酸序列能够结合并区分多个miRNA种类的前体和成熟形式。

9.一种包括如下步骤的方法：（a）提供间充质干细胞（MSC）；和（b）将癌基因引入所述间充质干细胞从而转化它，其中所述转化的间充质干细胞不将所述癌基因的基因产物分泌至其在其中生长的培养基中。

10.权利要求9的方法，其中：（a）所述癌基因包括c-myc；（b）所述间充质干细胞（MSC）包括已建立的细胞系，例如huES9.E1；或（c）所述间充质干细胞（MSC）来自于脐带。

11.权利要求9或10的方法，其中与尚未被转化的间充质干细胞相比，转化的间充质干细胞：（a）能够避开老化；（b）具有增高的增殖速率；（c）具有降低的群体倍增时间，例如24小时；或（d）具有增加的端粒末端转移酶活性。