[发明专利]针对A型流感病毒的基质蛋白-1的适配子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及特异性结合A型流感病毒的基质蛋白-1的核酸以及其用于检测目标样品中这种病毒的用途。

背景技术

流感是正粘病毒，有三个属，A型、B型和C型。A型和B型在临床上最重要，因为它们导致急性呼吸道感染，这是高度传染性的，并以很高的发病率和死亡率折磨着人类和动物。

A型病毒根据两种病毒表面糖蛋白，血凝素(HA)和神经氨酸苷酶(NA)，主要分为不同的抗原性亚型。目前鉴定了16种HA亚型(称为H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)，其中所有亚型都可以在野生的水鸟中发现。在HA和NA的135种可能的组合中，自从1993年首次分离该病毒以来，仅有4种(H1N1、H1N2、H2N2和H3N2)在人群中广泛传播。基质蛋白-1也是位于病毒衣壳内侧的流感病毒的主要结构成分。它也是A型流感病毒的变异最低的抗原。

目前公众和科学界对流感流行株的可能出现的担忧需要更早地诊断流感病毒。因此，有动机寻求能帮助医生检测目标样品中流感病毒的特异性探针。

例如，已经开发了针对基质蛋白-1的抗体作为用于检测临床样品中流感病毒的探针(Bucher等，(1991))。

适配子是代表抗体在分子识别方面的替代物的一类分子。适配子是具备事实上以高亲和力和特异性识别任何类型的靶分子的能力的寡核苷酸或寡肽序列。这种配体可以通过随机序列文库的指数富集的配体系统进化技术(SELEX)而分离，如Tuerk C和Gold L.，1990所述。因此，已经开发了数个针对流感病毒血凝素的适配子(例如参见Gopinath SC，Kawasaki K，Kumar PK.Selection of RNA-aptamers against human influenza B virus.Nucleic Acids Symp Ser(Oxf).2005；(49)：85-6.)。

发明简述

本发明涉及特异性结合A型流感病毒的基质蛋白-1的核酸以及其用于检测目标样品中这种病毒的用途。

更具体地，本发明涉及特异性结合A型流感病毒的基质蛋白-1的核酸，其特征在于所述核酸包含如下核苷酸序列：

5’-N1-NS1-U-N3-A-NS3-NS5-NS7-NS6-CGCAU-NS4-C-N4-NS2-N2-3’

其中：

-N1由一个核苷酸组成；

-NS1和NS2由长度为3或4个核苷酸的多核苷酸组成，并且NS1和NS2具有互补的序列；

-N3和N4由一个核苷酸组成，并且N4与N3互补；

-NS3和NS4由长度为3个核苷酸的多核苷酸组成，并且NS3和NS4具有互补的序列；

-NS5和NS6由长度为3个核苷酸的多核苷酸组成，并且NS5和NS6具有互补的序列；

-NS7由选自AGAAUC(SEQ ID NO：12)、UGAG(SEQ ID NO：13)、UAUUCC(SEQ ID NO：14)、AGAU(SEQ ID NO：15)、AGAATC(SEQ ID NO：16)或TGAG(SEQ ID NO：17)的多核苷酸组成；

-N2由与核苷酸N1互补或不互补的核苷酸组成。

本发明也涉及本发明的核酸用于检测或定量目标样品中基质蛋白-1的用途。

本发明也涉及本发明的核酸用于检测和/或定量目标样品中A型流感病毒的用途。

本发明也涉及包含固体载体并携带至少一种权利要求1-10中任一项所述的核酸的微阵列。

本发明也涉及包含至少一种本发明核酸的试剂盒。

发明详述

发明人鉴定了均能以高亲和力结合流感病毒的基质蛋白-1的一小组结构相关的核酸(适配子)(见实施例1)。而且发明人表明，本发明的适配子非常适于生产适配子微阵列，从而高效检测甚至复杂介质中的基质蛋白-1(见实施例2)。因此，本发明的适配子可以用于针对流感检测的各种诊断系统中。

因此，本发明的一个目的由特异性结合基质蛋白-1的核酸组成。

此处所用的术语“基质蛋白-1”是指流感病毒的基质蛋白-1。基质蛋白-1是具有所有A型流感病毒间共有的共同抗原性的型特异性的抗原，无论分离的原始来源是人、鸟、猪、马或其它动物种属。编码基质蛋白-1的示例性的天然氨基酸序列由SEQ ID NO：1表示。