[发明专利]用于在快速侧流免疫测定中增强灵敏度以及评估样品充足性和试剂反应性的方法和装置

权利要求书

1.用于检测液体样品中的分析物和检查方法试剂的反应性的方法，包括：

(a)通过在膜的顶面和底面上沿着待分离的区域周缘施加压缩力，以界定与非压缩周缘同心的膜的非压缩区域，从而分离包含至少一部分待分析的液体样品的一部分可压缩膜；

(b)在压力下将预定量的液体稀释剂递送至膜的分离的部分，以从膜的分离的部分释放至少一部分液体样品，从而提供稀释的样品；

(c)将稀释的样品与具有第一和第二末端的第二多孔膜接触，其中稀释的样品流向第一和第二末端;

(d)将稀释的样品从第二多孔膜的一个部分引导入第一流动路径，所述第一流动路径提供从第二多孔膜上游至吸收垫下游的流动，其中所述流动路径包括多孔膜和评估试剂反应性的试剂，按流动顺序包含：(i)包含针对待检测的分析物的种类的可移动的标志物的膜，(ii)包含特异于下游固定的配体的可移动的结合伴侣的桥接膜，所述配体用于检测稀释的样品中的目标分析物，所述可移动的结合伴侣能够被可移动的标志物识别，(iii)包含针对目标分析物的固定的配体的膜，和(iv)与用于固定的配体的膜直接流体连通或经外流芯膜与之连接的吸收垫;

(e)将来自第二多孔膜的不同部分的稀释的样品引导入第二流动路径，所述路径提供从第二多孔膜上游至吸收垫下游的流动并且包括多孔膜和用于检测特定目标分析物的试剂，按流动顺序包含：(i)包含可移动的标志物的膜，(ii)连接可移动的标志物膜与包含用于检测特定目标分析物的固定的配体的膜的桥接膜，和(iii)与用于固定的配体的膜直接流体连通或经外流芯膜与之连接的吸收垫;

(f)观察液体样品通过第一流动路径的迁移的结果，所述第一流动路径包括在针对目标分析物的固定的配体的位置处的标志物的可观察的条带，其允许确认标志物具有反应性并且能够结合待检测的分析物的种类，确认固定的配体具有反应性并且能够结合待通过测试检测的特定分析物，和确认特异于固定的配体的可移动的结合伴侣也具有反应性，从而表明该测试能够检测稀释的样品中的目标分析物，如果其存在的话；

(g)观察液体样品通过第二流动路径的迁移的结果，所述第二流动路径包括在针对目标分析物的固定的配体的位置处的标志物的可观察的条带，其允许确认目标分析物存在于稀释的样品中，如果存在的话，或者如果目标分析物不存在于稀释的样品中，则在第二流动路径中的固定的配体的位置处不存在标志物的可观察的条带；和

(h)如果没有标志物条带存在于第一流动路径的固定的配体部分，则观察到，所述测试方法不能得出有效解释。

2.权利要求1的方法，其中将固定的重组蛋白A在流动路径之一上固定在固定的抗原的下游，并且用于评估在稀释的测试样品中是否存在充足的免疫球蛋白，以允许检测稀释的测试样品中的特异于该抗原的抗体。

3.权利要求1或2的方法，其中可移动的标志物选自蛋白G、蛋白L和蛋白A，其各自结合至一个或多个可观察的组分，所述组分选自胶体金、磁性球和荧光标志物。

4.权利要求1-3的任一项的方法，其中可移动的标志物为结合至胶体金的蛋白G和蛋白L。

5.权利要求1-4的任一项的方法，其中包含可移动的标志物的膜在50%或更多的测定完成所需的总时间段中，将标志物递送至显现测定的特定分析物检测流动路径部分。

6.权利要求1-5的任一项的方法，其中包含可移动的标志物的膜在超过75%的测定完成所需的总时间段中，将标志物递送至显现测定的特定分析物检测流动路径部分。

7.权利要求1-6的任一项的方法，其中将稀释的样品的多孔膜与可移动的标志物的膜对齐，以提供与一系列稀释度的稀释的样品混合的标志物，所述一系列稀释度是从稀释的样品的最高浓度至仅包含20%或更少的最高浓度的稀释样品的稀释度。

8.权利要求1-7的任一项的方法，其中液体样品是来自哺乳动物的生物样品。

9.权利要求1-8的任一项的方法，其中液体样品是来自非哺乳动物的生物样品。

10.权利要求1-9的任一项的方法，其中液体样品是全血或其级分。

11.权利要求1-9的任一项的方法，其中液体样品是龈缝口腔液。

12.权利要求1-11的任一项的方法，其中分析物结合配体是抗原并且分析物是抗体。