[发明专利]治疗性核酸酶组合物和方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2009年11月2日提交的第61/257,458号美国临时专利申请和2010年8月4日提交的美国临时专利申请第61/370,752号的优先权，其全部内容通过引用整体并入本申请。

有关联邦政府赞助研究的声明

本发明在美国国立卫生研究院(基金号AI44257、NS065933和AR048796)、红斑狼疮研究联盟和华盛顿州生命科学发现基金(2087750)的资助下进行。政府享有本发明的某些权益。

序列表参考

本申请连同电子形式的序列表一起提交，该序列表以命名为DOCS-#2346946-vl-17583_PCT_Sequence_Listing_2010_12_07.txt_的文件提交，该文件于2010年12月7日创建，357Kb大小。该序列表通过引用并入本申请。

背景技术

在死亡和濒死细胞中，(核糖)核蛋白的过度释放可能通过两种机制导致狼疮病理学：(i)染色质/抗-染色质复合物沉积或在原位形成，导致肾炎并一步引起肾功能丧失；和(ii)通过Toll样受体(TLR)7、8和9以及不依赖于TLR的途径核蛋白活化先天免疫。核蛋白的释放可以作为系统性红斑狼疮自身抗体的有效抗原，通过抗原受体与TLRs的互相接触，使得B细胞扩增和DC细胞激活。需要在所需主体中除去刺激性抗原和/或使免疫刺激、免疫放大和免疫复合物介导疾病减轻的方法。

发明概述

本发明公开了一种杂交核酸酶分子，所述杂交核酸酶分子包括第一核酸酶结构域和Fc结构域，其中第一核酸酶结构域与Fc结构域有效偶联。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子进一步包括第一接头结构域，且第一核酸酶结构域通过第一接头结构域与Fc结构域有效地偶联。

在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是多肽，其中第一核酸酶结构域的氨基酸序列包含人野生型RNase氨基酸序列，其中第一接头结构域是(Gly4Ser)n，其中n为0、1、2、3、4或5，其中Fc结构域的氨基酸序列包含人野生型IgG1Fc结构域的氨基酸序列，且其中第一接头结构域与第一核酸酶结构域的C-末端和Fc结构域的N-末端连接。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含表2所示序列的多肽，或由表2中所示的序列组成的多肽。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含SEQ ID NO：149的多肽。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含SEQ ID NO：145的多肽。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含SEQ ID NO：161的多肽。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含SEQ ID NO：162的多肽。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是包含SEQ ID NO：163的多肽。

在某些实施方式中，杂交核酸酶分子包含与野生型人IgG1偶联的野生型人DNase 1。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子包含与野生型人IgG1Fc结构域连接的人DNase1G105RA114F，所述连接通过(gly4ser)n接头结构域，其中n＝0、1、2、3、4或5。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子包含与野生型人IgG1连接的野生型人RNase1，所述野生型人IgG1与野生型人DNase1连接。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子包含与野生型人IgG1连接的野生型人RNase1，所述野生型人IgG1与人DNase1G105R A114F连接。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是多肽，其中第一核酸酶结构域的氨基酸序列包含RNase氨基酸序列，其中第一接头结构域的长度在5至32个氨基酸之间，其中Fc结构域的氨基酸序列包含人Fc结构域氨基酸序列，且其中第一接头结构域与第一核酸酶结构域的C-末端和Fc结构域的N-末端偶联。在某些实施方式中，接头结构域包括(gly4ser)5和限制性位点BglII、AgeI和XhoI。在某些实施方式中，杂交核酸酶分子是多肽，其中第一核酸酶结构域的氨基酸序列包括人RNase氨基酸序列，其中第一接头结构域是长度为5至32个氨基酸的NLG肽，其中Fc结构域的氨基酸序列包含人野生型Fc结构域氨基酸序列，且其中第一接头结构域与第一核酸酶结构域的C-末端和Fc结构域的N-末端偶联。