[发明专利]调控的表达系统

权利要求书

1.一种基因构建体，其允许目的多核苷酸响应诱导剂的可诱导的肝特异性表达，包含：

（ⅰ）可诱导的双向操纵基因-启动子，其包含至少一个所述诱导剂的应答元件，所述应答元件两侧是第一肝特异性启动子序列和第二肝特异性启动子序列，其中两个肝特异性启动子序列以不同方式作用，

（ⅱ）第一核苷酸序列，其包含编码可以由所述诱导剂激活的反式激活因子的序列及位于相对于编码反式激活因子的区域3’端的聚腺苷酸化信号，其中编码反式激活因子的所述序列可操作地连接到第一肝特异性启动子序列，以及

（ⅲ）第二核苷酸序列，其包含可操作地连接到第二肝特异性启动子序列的多核苷酸及位于相对于目的多核苷酸3’端的聚腺苷酸化信号，

其中所述第一和第二肝特异性启动子序列的启动子活性由诱导剂存在时反式激活因子与操纵基因-启动子的操纵基因区域结合而诱导。

2.根据权利要求1所述的基因构建体，其中所述诱导剂的应答元件包含至少一个四环素-应答元件且所述反式激活因子是反向四环素反式激活因子。

3.根据权利要求2所述的基因构建体，其中所述四环素-应答元件包含SEQ ID NO：1中所限定的核酸序列。

4.根据权利要求2或3中任一项所述的基因构建体，其中所述反向四环素反式激活因子由包含序列 SEQ. ID. NO：6的多核苷酸编码。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的基因构建体，其中所述第一肝特异性启动子序列和所述第二肝特异性启动子序列是相同的。

6.根据权利要求5所述的基因构建体，其中所述第一肝特异性启动序列和所述第二肝特异性启动子序列包含白蛋白基因启动子或其同功能变体。

7.根据权利要求6所述的基因构建体，其中所述白蛋白基因启动子包含选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的序列。

8.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述可诱导的双向操纵基因-启动子包含SEQ ID NO：4。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的基因构建体，其中至少一个所述聚腺苷酸化信号是双向聚腺苷酸化信号。

10.根据权利要求9所述的基因构建体，其中所述聚腺苷酸化信号是来自SV40病毒的双向聚腺苷酸化信号。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的基因构建体，其中中目的多核苷酸编码IL-12或其同功能变体的重链和/或轻链。

12.根据权利要求11所述的基因构建体，其中所述目的多核苷酸编码单链IL-12。

13.一种载体，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的基因构建体。

14.一种重组病毒基因组，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的基因构建体。

15.根据权利要求14所述的病毒基因组，其中所述基因组来自重组腺相关病毒。

16.一种病毒粒子，其通过在适当的包装细胞中表达根据权利要求14或15中所述的病毒基因组来获得。

17.一种用于肝源性细胞中目的多核苷酸表达的体外方法，其包含以下步骤：

（ⅰ）将所述细胞与根据权利要求1至12中任一项所述的基因构建体、根据权利要求13所述的载体、根据权利要求14或15中所述的病毒基因组、或根据权利要求16所述的病毒粒子在所述构建体、所述载体或所述病毒粒子进入细胞的合适条件下相接触，以及

（ⅱ）将所述细胞与诱导剂接触必要的时间以发生目的多核苷酸的表达。

18.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的基因构建体、根据权利要求13所述的载体、根据权利要求14或15中所述的病毒基因组、或根据权利要求16所述的病毒粒子，及药学上可接受的载体。

19.根据权利要求1至12中任一项所述的基因构建体、根据权利要求13所述的载体、根据权利要求14或15中所述的病毒基因组、根据权利要求16所述的病毒粒子、或根据权利要求18所述的药物组合物，用作药物。