[发明专利]自由漂浮链：浆膜癌干细胞

权利要求书

1.一种用于产生浆膜癌干细胞的方法，所述方法包括

(a)在产生腹膜内(ip)肿瘤的条件下，用一定量的哺乳动物浆膜上皮肿瘤细胞腹膜内注射免疫减弱的、非人哺乳动物；

(b)从携带ip肿瘤的非人哺乳动物收获腹水；

(c)将所述腹水分流成包含浆膜自由漂浮链和白细胞的第一流分以及包含浆膜球形体的第二流分；

(d)从所述第一流分中去除所述白细胞以获得富含自由漂浮链的流分；

(e)在产生粘附间充质细胞以及富集浆膜癌干细胞的浆膜自由漂浮链的悬浮液的条件下，培养所述富含自由漂浮链的流分一定时间。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括：

(f)收集所述浆膜自由漂浮链的悬浮液；

(g)分离所述浆膜自由漂浮链与可能已经形成的任何浆膜球形体；

(h)在产生包含至少50-100%的浆膜癌干细胞的自由漂浮浆膜自由漂浮链的培养物的条件下，在悬浮液中连续传代所述自由漂浮链一定时间。

3.一种用于产生浆膜癌干细胞的方法，所述方法包括

(a)在产生腹膜内(ip)肿瘤的条件下，用一定量的哺乳动物浆膜上皮肿瘤细胞腹膜内注射免疫减弱的非人哺乳动物；

(b)从携带ip肿瘤的非人哺乳动物收获腹水；

(c)将所述腹水分流成包含浆膜自由漂浮链和白细胞的第一腹水流分以及包含浆膜球形体的第二腹水流分；

(d)在产生粘附间充质细胞以及自由漂浮的自由漂浮链和肿瘤球形体的悬浮培养物的条件下，培养所述第二流分一定时间；以及

(e)将所述悬浮培养物分流成包含富集浆膜癌干细胞的自由漂浮的自由漂浮链的第一培养流分以及包含富集浆膜癌干细胞的自由漂浮肿瘤球形体的第二培养流分。

4.根据权利要求3所述的方法，所述方法进一步包括

(f)在产生自由漂浮链和肿瘤球形体的另外的悬浮培养物的条件下，培养所述第二培养流分一定时间；

(g)将所述另外的悬浮培养物分流成自由漂浮链流分和肿瘤球形体流分；

(h)在产生包含至少10-30%浆膜癌干细胞的自由漂浮肿瘤球形体的悬浮培养物的条件下，使用所述自由漂浮肿瘤球形体流分重复步骤(f)和(g)一定时间。

5.一种用于分离浆膜自由漂浮链的方法，所述方法包括

(a)在产生腹膜内(ip)肿瘤的条件下，用一定量的哺乳动物浆膜上皮肿瘤细胞腹膜内注射免疫减弱的非人哺乳动物；

(b)从携带ip肿瘤的非人哺乳动物收获腹水；

(c)将所述腹水分流成包含浆膜自由漂浮链和白细胞的第一流分以及包含浆膜球形体的第二流分；以及

(d)从所述第一流分中去除所述白细胞以获得富含自由漂浮链的流分。

6.一种用来分离浆膜球形体的方法，所述方法包括

(a)在产生腹膜内(ip)肿瘤的条件下，用一定量的哺乳动物浆膜上皮肿瘤细胞腹膜内注射免疫减弱的非人哺乳动物；

(b)从携带ip肿瘤的非人哺乳动物收获腹水；

(c)将所述腹水分流成包含浆膜自由漂浮链和白细胞的第一流分以及包含浆膜球形体的第二流分；以及

(d)分离所述浆膜球形体。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，所述方法进一步包括在注射所述细胞一段足以产生ip肿瘤的时间以前、同时或以后，诱导腹膜内炎症。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非人哺乳动物是缺乏T细胞、B细胞和/或天然杀伤细胞的小鼠。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述小鼠是NOD/SCID小鼠、NSG小鼠或NOG小鼠。

10.根据权利要求1、3、5或6中任一项所述的方法，其中，分流包括通过30-60μm过滤器过滤所述腹水以获得包含所述浆膜自由漂浮链和白细胞的流过流分以及包含浆膜球形体的保留流分。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，浆膜是卵巢的。

12.分离的克隆纯浆膜癌干细胞。