[发明专利]使用过氧化物氧化还原酶1(PRX1)作为佐剂的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2009年12月8日提交的美国专利申请61/267,647的优先权，将其揭示的内容通过引用纳入本文。

技术领域

本发明总体上涉及免疫治疗领域，更明确而言，本发明涉及使用Prx1作为佐剂来增强针对抗原的免疫反应。

发明背景

Prx1是典型的2-半胱氨酸过氧化物氧化还原酶家族的一员，其主要的胞内功能是通过其过氧化物酶的活性作为过氧化氢信号通路的调控因子和作为蛋白质的伴侣蛋白。Prx1的表达在各种癌症中会上调，包括食管癌、胰腺癌、肺癌、甲状腺滤泡癌和口腔癌。Prx1水平的升高与临床结果不理想和病人整体存活情况降低相关。最近的研究证实Prx1可以由非小细胞肺癌细胞分泌，该分泌可能通过一种非经典的分泌途径。然而，分泌的Prx1的作用至今尚未知晓，之前也未就治疗目的加以探索。

发明内容

本发明提供了用于激发免疫反应的组合物和方法。这种组合物包括抗原和分离的Prx1蛋白。抗原和Prx1蛋白可以以复合物的形式提供，或者它们可以彼此共价连接。Prx1蛋白在复合物中可以以多聚体的形式存在。在一个实施方式中，所述多聚体是十聚体。组合物还可以包括接触过抗原和/或Prx1蛋白的抗原呈递细胞。

抗原可以是用于激发所需要的免疫反应的任何抗原，包括但不限于传染源或癌细胞表达的抗原。在一个实施方式中，抗原由肿瘤细胞表达。

在个体中激发针对抗原的免疫反应的方法包括给予该个体包含该抗原和分离的Prx1蛋白的组合物。所激发的免疫反应可强于该抗原在不给予分离的Prx1蛋白时所激发的免疫反应。激发的免疫反应可包括细胞介导的免疫反应、体液免疫及其组合。

在一个实施方式中，激发针对抗原的免疫反应的个体是有风险发生、被怀疑患有或已经诊断患有癌症的个体。

附图简要说明

图1.Prx1刺激巨噬细胞分泌细胞因子

(A)采用流式细胞仪检测TG诱出的巨噬细胞所表达的CD11b、Gr1和F4/80。示出3次独立分离的代表性柱状图，显示CD11b⁺细胞的Gr1和F4/80的表达情况。插入框中的数字表明是每个象限中CD11b⁺细胞的百分比。(B)将TG诱出的巨噬细胞和刺激物共同培养24小时，收获上清液后分析TNF-α(空心柱)和IL-6(灰色柱)的水平。结果以pg/ml为单位，代表了三组独立试验，误差线代表标准差。(C)将TG诱出的巨噬细胞分别如下培养24小时：仅用培养基(黑色柱)；用100nM LPS或2000nM Prx1(空心柱)；用100nM LPS或2000nM Prx1，经10ug/mL多粘菌素B预孵育20分钟(阴影线柱)；100nM LPS或变性的2000nM Prx1(灰色柱)。星号表示与仅用Prx1或LPS处理过的细胞相比p≤0.01。(D)将TG诱出的巨噬细胞分别以单独的培养基、Prx1(50nM)或LPS(100nM)培养24小时，灰色柱表示培养时添加10%的FBS，空心柱表示未添加10%的FBS。收获上清液，并分析IL-6的水平。结果以pg/ml为单位，误差线代表标准差。

图2.Prx1刺激树突状细胞的成熟与激活。(A和B)将未成熟的骨髓来源的树突状细胞(iBMDC)分别以单独的培养基、20-200nM Prx1或100nM LPS培养24小时。(A)培养后，通过流式细胞仪分析细胞中CD11c和CD86的表达情况。结果显示为占所有细胞的百分比，误差线代表标准差。(B)收获上清液，并对TNF-α进行分析。结果以pg/ml为单位，代表三组独立实验，误差线代表标准差。(C)将TG诱出的巨噬细胞与如下培养基共同培养：收获自培养转染有编码对照shRNA(乱序，Scramble)或Prx1特异性shRNA(shPrx1)的cDNA的前列腺肿瘤细胞系的培养基，或者是收获自培养表达Prx1特异性shRNA的细胞的培养基(其中添加了50nM外源性的Prx1，shPrx1+Prx1)。培养24小时后收获上清液，对TNF-α进行分析。结果以pg/ml为单位，代表三组独立试验，误差线代表标准差。