[发明专利]用于从类异戊二烯途径生产化学和医药产品的微生物工程

权利要求书

1.一种方法，其包括：

在过表达非甲羟戊酸(MEP)途径中一种或更多种组分的细胞中重组表达紫杉二烯合酶和牻牛儿基牻牛儿基二磷酸合酶(GGPPS)。

2.权利要求1的方法，其中所述细胞是细菌细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)细胞。

4.权利要求2的方法，其中所述细胞是革兰氏阳性细胞。

5.权利要求4的方法，其中所述细胞是芽孢杆菌(Bacillus)细胞。

6.权利要求1的方法，其中所述细胞是酵母细胞。

7.权利要求6的方法，其中所述酵母细胞是酵母属(Saccharomyces)细胞。

8.权利要求6的方法，其中所述酵母细胞是耶氏酵母属(Yarrowia)细胞。

9.权利要求1的方法，其中所述细胞是藻类细胞。

10.权利要求1的方法，其中所述细胞是植物细胞。

11.权利要求1的方法，其中所述紫杉二烯合酶是紫杉属(Taxus)的酶。

12.权利要求11的方法，其中所述紫杉二烯合酶是短叶紫杉(Taxus brevifolia)的酶。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述GGPPS酶是紫杉属的酶。

14.权利要求13的方法，其中所述GGPPS酶是加拿大紫杉(Taxus canadenis)的酶。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中编码所述紫杉二烯合酶的基因和/或编码所述GGPPS酶的基因和/或编码所述MEP途径中一种或更多种组分的基因是由一种或更多种质粒表达。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中编码所述紫杉二烯合酶的基因和/或编码所述GGPPS酶的基因和/或编码所述MEP途径中一种或更多种组分的基因整合到所述细胞的基因组中。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述非甲羟戊酸(MEP)途径中一种或更多种组分选自dxs、ispC、ispD、ispE、ispF、ispG、ispH、idi、ispA和ispB。

18.权利要求17的方法，其中dxs、idi、ispD和ispF被过表达。

19.权利要求18的方法，其中dxs、idi、ispD和ispF在操纵子dxs-idi-idpDF上过表达。

20.权利要求1-19中任一项的方法，其中编码所述紫杉二烯合酶的基因和编码所述GGPPS酶的基因在操纵子上一起表达。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述细胞还表达紫杉二烯5α-羟化酶(T5αOH)或其催化活性部分。

22.权利要求21的方法，其中所述T5αOH酶或其催化活性部分与细胞色素P450还原酶或其催化活性部分融合。

23.权利要求22的方法，其中所述T5αOH酶是At24T5αOH-tTCPR。

24.权利要求1-23中任一项的方法，其中使紫杉二烯合酶、GGPPS酶和MEP途径中一种或更多种组分的表达相平衡，以使紫杉二烯的产量最大化。

25.权利要求1-24中任一项的方法，还包括培养所述细胞。

26.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述细胞产生紫杉二烯或紫杉二烯-5α-醇。

27.权利要求26的方法，其中产生至少10mg L^-1的紫杉二烯。

28.权利要求27的方法，其中产生至少250mg L^-1的紫杉二烯。

29.权利要求26的方法，其中产生至少10mg L^-1的紫杉二烯-5α-醇。

30.权利要求29的方法，其中产生至少50mg L^-1的紫杉二烯-5α-醇。