[发明专利]在原核细胞中产生免疫原性多糖的生物合成系统

权利要求书

1.一种重组N-糖基化蛋白，其包含：

引入的共有序列D/E–X–N–Z–S/T中的一个或多个，其中X和Z可以为除脯氨酸以外的任何天然氨基酸；和

在还原末端具有N-乙酰基半乳糖胺的聚糖，其与至少所述一个或多个引入的共有序列通过N-糖苷键连接。

2.权利要求1的重组N-糖基化蛋白，其中所述蛋白是铜绿假单胞菌胞外蛋白。

3.权利要求1的重组N-糖基化蛋白，其中所述聚糖包含来自革兰氏阴性菌的寡糖或多糖。

4.权利要求3的重组N-糖基化蛋白，其中所述寡糖或多糖是来自弗氏志贺氏菌。

5.权利要求4的重组N-糖基化蛋白，其中所述寡糖或多糖是来自弗氏志贺氏菌6。

6.权利要求1的重组N-糖基化蛋白，其中所述聚糖包含寡糖或多糖，其包含以下结构：

7.权利要求3的重组N-糖基化蛋白，其中所述寡糖或多糖是来自大肠杆菌。

8.权利要求7的重组N-糖基化蛋白，其中所述寡糖或多糖是来自大肠杆菌O157。

9.权利要求1的重组N-糖基化蛋白，其中所述聚糖包含寡糖或多糖，其包含结构α-D-PerNAc-α-L-Fuc-β-D-Glc-α-D-GalNAc。

10.一种生物缀合物疫苗，其包含权利要求1的重组N-糖基化蛋白和佐剂。

11.一种重组原核生物合成系统，其包含编码以下酶和蛋白的核酸：

在十一异戊二烯基焦磷酸上合成N-乙酰基半乳糖胺的差向异构酶；

在脂质载体上装配寡糖或多糖的糖基转移酶；

寡糖基转移酶；和

包含引入的共有序列D/E–X-N–Z–S/T中的一个或多个的蛋白，其中X和Z可以为除脯氨酸以外的任何天然氨基酸。

12.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中编码差向异构酶的所述核酸包含SEQ ID NO.1。

13.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖基转移酶是来自空肠弯曲杆菌。

14.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中所述蛋白是铜绿假单胞菌胞外蛋白。

15.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖是来自革兰氏阴性菌。

16.权利要求15的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖是来自弗氏志贺氏菌。

17.权利要求16的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖是来自弗氏志贺氏菌6。

18.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖包含以下结构：

19.权利要求15的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖是来自大肠杆菌。

20.权利要求19的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖是来自大肠杆菌O157。

21.权利要求11的重组原核生物合成系统，其中所述寡糖或多糖包含结构α-D-PerNAc-α-L-Fuc-β-D-Glc-α-D-GalNAc。

22.一种产生N-联糖基化蛋白的方法，包括：

a.)将编码i.)～iv.)的核酸导入宿主生物中：

i.)在十一异戊二烯基焦磷酸上合成N-乙酰基半乳糖胺的差向异构酶；

ii.)在脂质载体上装配寡糖或多糖的糖基转移酶；

iii.)寡糖基转移酶；和

iv.)包含引入的共有序列D/E–X-N–Z–S/T中的一个或多个的蛋白质，其中X和Z可以为除脯氨酸以外的任何天然氨基酸；和

b.)培养所述宿主生物直到至少一种N-糖基化蛋白产生。

23.权利要求22的方法，其中编码差向异构酶的所述核酸包含SEQ ID NO.1。

24.权利要求22的方法，其中所述寡糖基转移酶是来自空肠弯曲杆菌。

25.权利要求22的方法，其中所述蛋白是铜绿假单胞菌胞外蛋白。