[发明专利]针对GPVI的新的拮抗剂抗体及其Fab片段及其用途

权利要求书

1. 一种抗体Fab片段，其与人GPVI特异性结合并诱导GPVI耗尽表型。

2. 权利要求1的抗体Fab片段，其中所述抗体Fab片段与人GPVI的构象表位结合，并接触包括Ser 43、Arg 67和Asp 81的人GPVI残基。

3. 权利要求1或2的抗体Fab片段，其中所述Fab片段包含

(a) 重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其具有由SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20限定的氨基酸序列；和

(b) 轻链可变区(LCVR)的互补决定区(CDR)，其具有由SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23限定的氨基酸序列；且

其中各CDR的至少2个氨基酸残基可变成另一个氨基酸残基而又不直接破坏与GPVI表位残基的接触。

4. 权利要求1-3中任一项的抗体Fab片段，其中所述抗体Fab片段包含SEQ ID NO.6的重链和SEQ ID NO.8的重链或与这些序列有至少80%同一性的序列，只要保持抗体Fab片段结合特异性即可。

5. 前述权利要求中任一项的抗体Fab片段，所述抗体Fab片段是人源化的。

6. 权利要求5的抗体Fab片段，其中所述人源化Fab片段包含选自以下的重链可变区(HCVR)氨基酸序列和轻链可变区(LCVR)氨基酸序列的组合：

(a) LCVR (SEQ ID NO.15)和HCVR (SEQ ID NO.10)；

(b) LCVR (SEQ ID NO.15)和HCVR (SEQ ID NO.11)；

(c) LCVR (SEQ ID NO.15)和HCVR (SEQ ID NO.12)；

(d) LCVR (SEQ ID NO.15)和HCVR (SEQ ID NO.13)；

(e) LCVR (SEQ ID NO.15)和HCVR (SEQ ID NO.14)；

(f) LCVR (SEQ ID NO.16)和HCVR (SEQ ID NO.11)；

(g) LCVR (SEQ ID NO.17)和HCVR (SEQ ID NO.11)；和

(h) LCVR (SEQ ID NO.17)和HCVR (SEQ ID NO.13)。

7. 一种经改造的Fab片段，其包含人源化重链(HC)氨基酸序列和人源化轻链(LC)氨基酸序列的组合，其中所述人源化重链还包含c端突出端，所述c端突出端包含额外的氨基酸残基，且其中所述c端突出端防止被抗Fab抗体识别。

8. 权利要求7的经改造的Fab片段，其中所述c端突出端选自SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37。

9. 权利要求7或8的经改造的Fab片段，其中所述Fab片段如权利要求1-6中任一项所限定。

10. 一种药物组合物，其包含权利要求1-9中任一项限定的抗体Fab片段和药学上可接受的载体或赋形剂。

11. 一种编码选自以下的多肽的多核苷酸：SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17或与这些序列有至少80%同一性的序列，只要所述多肽保持其结合特异性即可。

12. 一种用于制备权利要求1-9中任一项限定的抗体Fab片段的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 培养表达权利要求1-9限定的抗体Fab片段的细胞系，

b. 纯化在培养基中表达的Fab片段，

c. 以合宜形式配制Fab片段。

13. 权利要求1-9中限定的抗体Fab片段，其用于预防或治疗血栓形成性疾病和血管疾病。

14. 一种用于防止抗体Fab片段被预先存在的抗体识别的方法，所述方法在于通过加入分子掩蔽抗体Fab片段的c末端。

15. 一种用于防止在使用抗GPVI Fab时血小板活化的方法，所述方法在于通过加入分子掩蔽抗体Fab片段的c末端。