[发明专利]耐除草剂大豆植物及鉴定其的方法

权利要求书

1.一种用于鉴定原种事件EE-GM3和EE-GM1在生物样品中的同时存在的方法，所述方法包括利用特异性识别EE-GM3的包含耐除草剂基因的外源DNA的5’或3’侧翼区域的特异性引物或探针检测EE-GM3特异性区域，和利用特异性识别EE-GM1的包含耐除草剂基因的外源DNA的5’或3’侧翼区域的特异性引物或探针检测EE-GM1特异性区域。

2.权利要求1所述的方法，所述方法包括使用利用至少两个引物的第一聚合酶链式反应，和使用利用至少两个引物的第二聚合酶链式反应，从存在于所述生物样品中的核酸扩增两个50至1000bp的DNA片段，在所述第一聚合酶链式反应中，所述引物之一识别EE-GM3的包含耐除草剂基因的外源DNA的5'侧翼区域或EE-GM3的包含耐除草剂基因的外源DNA的3'侧翼区域，所述5'侧翼区域包含SEQ ID No 2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，所述3'侧翼区域包含SEQ ID No 3的核苷酸241至核苷酸1408的互补序列的核苷酸序列，所述引物的另一个引物识别EE-GM3的外源DNA内的序列，所述外源DNA包含SEQ ID No.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，或所述引物的另一个引物识别EE-GM3的外源DNA内的序列，所述外源DNA包含SEQ ID No.1的核苷酸序列或其互补序列，或包含SEQ ID No.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互补序列，并且在所述第二聚合酶链式反应中，所述引物之一识别EE-GM1的包含耐除草剂基因的外源DNA的5'侧翼区域或EE-GM1的包含耐除草剂基因的外源DNA的3'侧翼区域，所述5'侧翼区域包含SEQ ID No 12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，所述3'侧翼区域包含SEQ ID No 13的核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列，所述引物的另一个引物识别EE-GM1的外源DNA内的序列，所述外源DNA包含SEQ ID No.12的核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列，或所述引物的另一个引物识别EE-GM1的外源DNA内的序列，所述外源DNA包含SEQ ID No.11的核苷酸序列或其互补序列，其中所述第一聚合酶和第二聚合酶反应可以是相继的或同时的。

3.权利要求2所述的方法，其中识别EE-GM3的5'侧翼区域的所述引物包含选自SEQ ID No 2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列或识别EE-GM3的3'侧翼区域的所述引物包含选自SEQ ID No 3的核苷酸241至核苷酸1408的互补序列的核苷酸序列的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列，并且识别EE-GM3的外源DNA内的序列的所述引物包含选自SEQ ID No.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互补序列的核苷酸序列或SEQID No 3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQ ID No.1的核苷酸序列或其互补序列、或SEQ ID No.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互补序列的17至200个连续核苷酸，并且其中识别EE-GM1的5'侧翼区域的所述引物包含选自SEQ IDNo 12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列，或识别EE-GM3的3'侧翼区域的所述引物包含选自SEQ ID No 13的核苷酸569至核苷酸1000的互补序列的核苷酸序列的17至200个连续核苷酸的核苷酸序列，并且识别EE-GM1的外源DNA内的序列的所述引物包含选自SEQ ID No.12的核苷酸210至核苷酸720的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQ ID No.11的核苷酸序列或其互补序列的17至200个连续核苷酸。